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* 专题九 现代生物科技专题 Ⅰ Ⅱ Ⅱ Ⅰ Ⅱ Ⅰ Ⅱ Ⅰ Ⅰ Ⅱ 基因工程 (1)基因工程的诞生 (2)基因工程的原理及技术 (3)基因工程的应用 (4)蛋白质工程 克隆技术 (5)植物的组织培养 (6)动物的细胞培养与体细胞克隆 (7)细胞融合与单克隆抗体 (8)动物胚胎发育基本过程与胚胎工程的理论基础 (9)胚胎干细胞的移植 (10)胚胎工程的应用 要求 考纲内容 Ⅰ Ⅰ Ⅰ Ⅱ Ⅰ 转基因生物安全 (11)转基因生物的安全性 (12)生物武器对人类的威胁 (13)生物技术中的伦理问题 生态工程 (14)简述生态工程的原理 (15)生态工程的实例 要求 考纲内容 运载体 基因重组 提取目的基因 全能性 单克隆抗体制备 受精 早期胚胎培养 卵裂期 囊胚期 两核苷酸的脱氧核糖与磷酸之间形成 的磷酸二酯键 作用 部位 携带目的基因进入 受体细胞 拼接 DNA 片段,形 成重组 DNA 切割目的基因和 载体 作用 载体 DNA 连接酶 限制酶 基因工程 1.实质:在分子水平上利用特殊工具将特定基因转入受体 细胞,使其产生所需性状。 2.基本工具: 质粒、λ噬菌体的衍 生物、动植物病毒 E·coliDNA 连接酶、 T4DNA 连接酶 EcoRⅠ限制酶 SmaⅠ限制酶 常用 类型 ①能在宿主细胞内 稳定存在并大量复 制 ②有多个限制酶切 割位点 ③具有特殊的标记 基因 ①E·coliDNA 连接 酶只能连接黏性末 端 ②T4DNA 连接酶能 连接黏性末端和平 末端 ①识别特定的核 苷酸序列 ②在特定位点上 切割 作用 特点 (条件) 载体 DNA 连接酶 限制酶 3.操作程序: (1)目的基因的获取: ①目的基因:指编码蛋白质的结构基因 。 ②途径: a.从基因文库中获取。 b.人工合成:化学合成法、反转录法。 c.利用 PCR 技术扩增。 (2)基因表达载体的构建: ①目的:使目的基因在受体细胞中稳定存在,遗传给下一 代;使目的基因能够表达和发挥作用。 ②组成:目的基因+启动子+终止子+标记基因(常用抗生 素基因)。 (3)将目的基因导入受体细胞: Ca2+处理细胞→感受态细胞→重组表达载体与感受态细胞混合→感受态细胞吸收DNA分子 目的基因表达载体提纯→取卵(受精卵)→显微注射→受精卵发育→获得具有新性状的动物 目的基因插入Ti质粒的T-DNA上→农杆菌→导入植物细胞→整合到受体细胞的染色体DNA→表达 转化过程 原核细胞 受精卵 体细胞 受体细胞 Ca2+处理法 显微注射法 农杆菌转化法 常用方法 微生物细胞 动物细胞 植物细胞 生物种类 (4)目的基因的检测和鉴定: 包括抗虫或抗病的接种实验,以确定是否有抗性以及抗性程度;基因工程产品与天然产品进行活性比较,以确定功能是否相同等 个体水 平鉴定 同上 抗原-抗体杂交 是否翻译出蛋白质 同上 分子杂交技术(DNA和mRNA之间) 是否转录出mRNA 是否显示出杂交带 DNA分子杂交技术(DNA和DNA之间) 目的基因是否插入受体细胞染色体的DNA上 分子水 平检测 结果显示 方法 检测内容 类型 【典例 1】(2012 年浙江高考)天然的玫瑰没有蓝色花,这 是由于缺少控制蓝色色素合成的基因 B,而开蓝色花的矮牵牛 中存在序列已知的基因 B。现用基因工程技术培育蓝玫瑰,下 列操作正确的是( ) A .提取矮牵牛蓝色花的 mRNA ,经逆转录获得互补的 DNA,再扩增基因 B B.利用限制性核酸内切酶从开蓝色花矮牵牛的基因文库 中获取基因 B C.利用 DNA 聚合酶将基因 B 与质粒连接后导入玫瑰细胞 D.将基因 B 直接导入大肠杆菌,然后感染并转入玫瑰细 胞 [名师点拨]提取矮牵牛蓝色花的mRNA,逆转录得到DNA, 然后扩增,可获得大量的基因 B,A 正确;从基因文库中获取 目的基因,只要根据目的基因的相关信息和基因文库中的信息 进行筛选对比即可,不需要用限制酶进行切割,B 错误;目的 基因与质粒的连接需要用 DNA 连接酶,而不是 DNA 聚合酶, C 错误;目的基因需要和运载体连接形成重组质粒后再导入, 而且应该用农杆菌进行感染玫瑰细胞,而不是大肠杆菌,D 错 误。 [答案]A 【典例 2】(2012 年全国新课标)根据基因工程的有关知识, 回答下列问题。 (1)限制性内切酶切割 DNA 分子后产生的片段,其末端类 型有__________和__________。 (2)质粒运载体用 EcoRⅠ切割后产生的片段如下: AATTC……G G……CTTAA 为使运载体与目的基因相连,含有目的基因的 DNA 除可 用 EcoRⅠ切割外,还可用另一种
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