结核分支杆菌..doc

结核病是由结核分枝杆菌感染引起的慢性消耗性传染病，严重威胁人类健康和生命。据世界卫生组织（WHO）估计，如果不能有效控制结核病，2000年至2020年将有10亿人感染结核分枝杆菌，2亿人发展为结核病，3500万人死于该病。结核分枝杆菌高水平的潜伏感染以及与HIV的合并感染，给结核病的预防、诊断和治疗带来了很大困难。 卡介苗是法国科学家Camille Guerin和Albert Calmette将牛结核分枝杆菌强毒株在体外长期培养开发出的减毒活疫苗，1921年开始应用于人类，已有超过30亿人接种。目前，卡介苗仍作为唯一的结核疫苗在发展中国家广泛使用。虽然卡介苗在预防结核上做出了重要贡献，如有效帮助儿童预防结核等传染病的发生，但是也存在很多问题，如卡介苗对成人肺结核的免疫保护存在较大争议，保护率为0-80%，一般为40%～60%。另有研究表明，在事先接触过环境分枝杆菌或接种过卡介苗的人群中，卡介苗被机体既存的免疫应答所阻断，从而导致免疫失败，因此，卡介苗只对既未感染过分枝杆菌又未接种过卡介苗的人群有效。 因此，结核分枝杆茵影响人类健康以及卡介苗存在的诸多问题使结核新型疫苗的研发十分紧迫。 一、结核疫苗的研究策略与进展 目前结核疫苗研究主要有两个方向，一是改造现有的卡介苗，例如开发重组卡介苗；二是开发有效的新型疫苗，例如构建亚单位疫苗（包括蛋白多肽、DNA疫苗）和以病毒为载体的疫苗等。 单独用一种结核疫苗免疫一次通常不足以产生较好的免疫保护作用。因此，在初次免疫的基础上，用相同或不同的疫苗进行加强免疫以达到增强免疫效果的目的，即初始一加强免疫策略。该策略对提高结核疫苗的免疫效力尤其对提高成人肺结核的免疫保护力意义非凡。该策略可分为同源初始一加强免疫策略（用同一种疫苗进行初始与加强免疫）和异源初始一加强免疫策略（用不同种疫苗进行初始与加强免疫）。据报道，异源初始一加强免疫策略较同源初始加强免疫策略能引起更高效的细胞免疫应答，很可能成为未来结核疫苗免疫接种的最理想方式。应用于异源初始加强免疫策略中的结核疫苗选择方案主要有两种，以DNA疫苗作初始免疫，以病毒载体疫苗进行加强免疫；以卡介苗作初始免疫，以亚单位疫苗进行加强免疫。目前研究的结核疫苗主要有重组卡介苗、蛋白多肽疫苗、DNA疫苗和活载体疫苗等。 1.重组卡介苗：虽然卡介苗在儿童中安全有效，但是在成人中免疫保护性争议较大。以提高卡介苗的成人免疫保护力为目标，研究者做了大量工作，例如将编码结核免疫优势抗原或免疫刺激细胞因子的基因导入卡介苗中构建重组卡介苗，有效地增强卡介苗的免疫保护效果。另外，由于接种的卡介苗被吞噬细胞吞噬后易于吞噬体中持续存在，处于不活动状态，削弱其对免疫细胞的刺激作用，从而影响免疫应答强度。因此，构建促使卡介苗从吞噬体中释放的重组卡介苗也是提高免疫力的一种措施。有学者构建了一种重组表达PfoA的卡介苗，PfoA能促使吞噬体瓦解，将重组卡介苗释放到细胞质，增强对CD8+T淋巴细胞刺激作用，从而提高细胞免疫应答水平。 但重组卡介苗的研究面临一个难题，即一般细菌的表达系统不能在卡介苗中很好地发挥基因表达功能，为构建卡介苗的表达载体带来很大困难。为解决该问题，对结核分枝杆菌的转录信号做了很多研究，为了解结核基因的转录、表达和结核分枝杆菌启动子与其他细菌的差异性以及解决表达问题提供良好基础。用含有结核分枝杆菌启动子的表达载体构建的重组卡介苗，能高效表达一些免疫优势抗原，例如Ag85A、Ag85B、Ag85C、6×103早期分泌靶抗原蛋白（ESAT6）等。此外，在卡介苗中重组表达IFN和IL-12等细胞因子，可提高免疫应答水平，但也有研究结果表明，局部细胞因子过高反而会造成机体的病理性损伤。 目前进入临床试验的重组卡介苗有重组表达Ag85A疫苗（r卡介苗30）和重组表达李斯特菌溶解素，尿素酶缺陷型卡介苗（VPM 1002）c9]。虽然r卡介苗VPM 1002在美国已完成Ⅰ期临床试验，且开发者表示该疫苗有良好的免疫耐受性和免疫原性，但目前还无令人振奋的结果出现。 2.蛋白多肽疫苗：蛋白多肽疫苗不仅有良好的安全性，而且能特异性地诱导CD4+Th1细胞和CD8+细胞毒T淋巴细胞活化，是较为理想的疫苗形式之一。抗原的选择和佐剂的应用可能对其开发起决定性作用。 作为候选疫苗的蛋白或多肽是从免疫优势抗原中筛选出来的，包含人T淋巴细胞识别表位，主要为结核分枝杆菌的分泌蛋白和细胞壁成分，例如ESAT-6、Ag85、MTB39和MTB32等。单一抗原由于抗原谱窄，不足以引起有效的免疫保护，因此，将多个抗原混合或融合表达是提高疫苗免疫保护的措施。研究表明，融合蛋白比多个抗原混合物能更有效地诱导出免疫保护，但机制尚不清楚，可能与抗原稳定性以及摄取和传递效率有关。另有研究表明，多种抗原之间可能存在相互竞