第五章 获得性免疫【参考】.pptVIP

4．乳剂配方与乳化方法 使用不同乳化剂和不同的配合比例及乳化方法，决定了制备乳剂的性状和稳定性。疫苗生产中主要有两种基本方法。 （1）剂在水中法：此法将乳化剂直接溶于水中，在激烈搅拌下将油加入，可直接生成O/W乳剂。若欲得W/O型，可继续加入油，直到发生变型。该法通常用匀浆器或胶体磨，高速搅拌而得到较好的乳剂。 （2）剂在油中法： 此法将乳化剂溶于油相，将油相直接加入水相中得O/W，如水相直接加入油相，得到W/O型，如欲得O/W，继续加入至变型。该法制成的乳剂，一般均匀颗粒直径在0.5μm左右，比较稳定。 免疫实验动物用的佐剂 其配方按容量计为： 矿物油（白油）75%~85％， 乳化剂15％~25%，混合后经除菌过滤而成为弗氏不完全佐剂（FIA）；如向其中加入0.5mg／m1死结核杆菌即为弗氏完全佐剂（FCA）。 使用时，将含抗原的水相，与上述任一佐剂等量混合，用力振摇即可成为均匀的乳剂。 也可用9份油和1份司本-80混合后加2％吐温-80和1％~2%硬脂酸铝，经高压灭菌后备用，注射前将配好的油佐剂与抗原水相1：1混合，强力振摇，可配制成性状良好的乳剂疫苗。 副作用 弗氏佐剂具有高度佐剂活性，因而应用广泛。但因副作用强烈而限制其应用。很少用于动物免疫。 ①油通过肌膜层造成组织损伤，局部形成结节和无菌性脓肿。 ②加入了结核菌素，能使PPD试验阳性。③可能致癌； ④过于粘稠，难以注射。 大量生产 可将94％白油与6％司本-80混合后加1%~2％硬脂酸铝，灭菌后即为油相； 将抗原液加2％~4%吐温-80为水相。 乳化时，将油相与水相按3：1~2：1比例配制，先缓速混合，再通过胶体磨充分乳化，可获得稳定的油包水乳剂苗。 双相乳剂疫苗：将粘稠的W/O乳剂疫苗，再加2％吐温-80生理盐水，通过搅拌或胶体磨乳化，可制成双相乳剂疫苗（水-油-水乳剂或称多型乳剂Multiple emulsion adjuvant）。 优点是：粘稠度低、在注射部位易分散、局部反应轻微及佐剂效应良好等。 5．油乳剂检验 生产实际中以粘度测定和稳定性测定为主。 （1）粘度测定：最简易的方法是取内口直径为1.2mm的吸管，在室温下吸满lml乳剂，垂直放出0.4ml所需时间作为粘度单位，以0.4ml 2～6S为合格，不得多于10～15S，否则注射时就比较困难。也可用Saybolt粘度计。 （2）乳剂稳定性测定：①加速老化法：疫苗于37℃贮存10～30d不破乳。②离心加速分层法：在一个半径为10cm的离心器中装油乳剂，3 000rpm离心15min不分层，相当于保存1年以上不破乳。 （三）蜂胶佐剂 1．蜂胶的理化特性与质量标准 蜂胶（Propolis）是蜜蜂采自柳树、杨树、栗树和其它植物幼芽分泌的树脂，并混入蜜蜂上颚腺分泌物，以及蜂蜡、花粉及其它一些有机与无机物的一种天然物质，含有多种黄酮类、酸类、醇类、酚类、脂类、烯烃和萜类等化合物及多种氨基酸、酶、多糖、脂肪酸、维生素及化学元素，是一种优良的天然药物。 2．蜂胶的佐剂作用 蜂胶具有广泛的生物活性和药理作用。 具有抗菌、抗病毒、抗肿瘤、消炎、增强机体免疫功能和促进组织再生等作用。 蜂胶具有良好的免疫增强作用。它能保持抗原特性，增强巨噬细胞的吞噬能力，促进抗体的产生，提高机体的特异性和非特异性免疫力。 3．蜂胶佐剂疫苗制备方法 （1）蜂胶的处理：用市售蜂胶，放4℃以下低温贮存，用前在4～8℃下粉碎，过筛，按1：4（W/V）加95％的乙醇，室温浸泡24～48h，冷却，过滤或离心取上清，即得透明栗色纯净蜂胶浸液。除去干渣计算出浸液中含蜂胶量，浸液4℃以下保存备用。 （2）蜂胶佐剂疫苗的制备 （以禽霍乱蜂胶疫苗为例）：将纯净培养的鸡多杀性巴氏杆菌液，经甲醛灭活后，加入蜂胶乙醇浸液，使每毫升菌液中含蜂胶10mg，边加边摇荡，迅即成为乳浊状，即为蜂胶佐剂疫苗。 四、细胞因子类佐剂 1979年第2届国际淋巴因子会议命名第1个细胞因子白细胞介素2（interleukin-2，IL-2） 在机体免疫系统活动过程中，有许多种体液性免疫分子和细胞因子参与。 前者如免疫球蛋白、补体和胸腺肽类。 后者作为免疫活性细胞间相互作用的介质和强有力的蛋白性调节因子，可以调节免疫反应、炎性反应、组织修复、组织移植反应和造血。 （一）细胞因子的概念与分类 细胞因子（cytokine）是机体的各种细胞在其生命周期中所释放的具有不同生物学效应的物质，是免疫细胞间相互作用的调节信号。该类物质相互诱生，相互影响，构成一个巨大的细胞因子网络（cytokine network）系统，各种细胞借助自己所释放的细胞因子完成各自的功能，在免疫应答中发挥作用。 分类 一类为经典的细胞