在AU2700生化分析以上测定IgG限额参数MaxOD的设置..docVIP

在AU2700生化分析仪上测定IgG限额参数MaxOD的设置 史连义 刘继勇 谢卫 张继领 王鑫 中国石油中心医院检验科 065000 【摘要】目的 在全自动生化分析仪OLYMPUS AU2700上设置免疫透射比浊项目IgG的限额参数MaxOD，自动识别抗原过量现象。方法 用不同浓度IgG进行测定，绘制剂量反应曲线，找到抗原抗体反应出现等价带及后带时的吸光度值进行设置。结果 在临床工作中应用科华试剂可能出现等价带现象不会出现后带现象。MaxOD可设为1.3140。结论 通过设置MaxOD可自动识别抗原过量，避免错误结果的发出。 【关键词】限额参数MaxOD，免疫透射比浊法，抗原抗体反应，抗原过量 免疫透射比浊测定方法是利用抗原抗体在液相中反应形成浊度进而比浊测定的一种方法。其基本原理是抗原在相应的一定量的过量抗体溶液中反应形成抗原抗体复合物，其浊度的大小与抗原含量成正比。但这种正比关系并非直线线性关系，当抗原浓度过高（出现等价带及后带反应）时，这种正比关系即不存在。如果仍然依据这种关系进行计算，就会发出错误结果。这就要求我们注意识别抗原过量的现象，以稀释后重测。我们以IgG测定为例，在AU2700生化分析仪上通过设定限额参数MaxOD，来自动识别抗原过量发生。 1 材料与方法： 1.1 试剂:免疫球蛋白IgG定量测定试剂盒 ，上海科华生物工程股份有限公司生产，批号 1.2 仪器 OLYMPUS AU2700全自动生化分析仪。 1.3 仪器参数 S:3ul,R1:200ul, R2:100ul ,λ:750nm ,Reaction Slope： +, Measuring Point:0-27/0-10, Method:end。 1.4 定标方式：五点定标:5AB Polygonal，校准液IgG浓度：2.4 g/L ，4.8g/L ，9.6g/L ,19.0g/L，37.0 g/L。 1.5 剂量反应曲线的绘制：定标后，选用已知较高浓度样品采用稀释和增加样本用量的方法，获得一系列IgG浓度值的样品，IgG浓度分别为0、20.0、26.6、30.8、40.0、 44.4、50.0、57.0、66.7、80.0、100.0、120.0、135.0、150.0g/L。用AU2700测定反应吸光度OD值。以IgG浓度为横坐标, OD为纵坐标,绘制IgG剂量反应曲线图。 1.6 MaxOD的设置：将测定方法由终点法(End)改为固定点法(Fixed)。从剂量反应曲线图中在前带与等价带交界处选取合适的吸光度OD值设置为最大允许吸光度MaxOD。在设置MaxOD前后分别测定一系列IgG浓度值的样品，验证设置MaxOD后其提示抗原过量的作用。 2 结果： 2.1 剂量反应曲线 以IgG浓度为横坐标, OD为纵坐标,绘制IgG剂量反应曲线图,结果见表1和图1。 表1 不同浓度IgG对应测定吸光度值 浓度（g/L） 0 20.0 26.6 30.8 40.0 44.4 50.0 吸光度 0 0.7475 0.9231 1.0900 1.1831 1.2226 1.3140 浓度（g/L） 57.0 66.7 80.0 100.0 120.0 135.0 150.0 吸光度 1.3232 1.3323 1.3433 1.3300 1.2935 1.2682 1.2300 图1 IgG剂量反应曲线图 从表1和图1中可以看出,基于抗原抗体反应的免疫透射比浊测定方法的IgG的剂量反应曲线,是一条双向反应曲线,在抗体浓度一定的条件下,IgG 浓度约在50.0g/L以下时为前带区域，IgG 浓度与OD 值成正比关系；约在50.0g/L-100.0g/L时,反应OD值变化不大,即反应处于等价带；当IgG100.0g/L时,随IgG 浓度的升高，吸光度反而下降,即处于后带区域。由此可见,使用科华试剂的直接可测定范围为50.0g/L以下。我们在临床实验工作中,经常发现有些疾病如肝硬化、系统性红斑狼疮IgG明显升高，有些疾病可升高到正常值的四倍以上。据报道，恶性浆细胞病IgG浓度可达59.0±19.0g/L，超过反应曲线的前带区，而达到等价带反应区，但达不到后带反应区。 2.2 设置MaxOD 从以上剂量反应曲线可知，IgG50.0g/L时，反应吸光度略微上升，但已进入等价带。我们将反应方法由终点法（End）改为固定点法（Fixed），以IgG 等于50.0g/L时吸光度值1.3140设为MaxOD，先后再次测定不同浓度IgG样本，得出不同结果，见表 2。由表2可以看出，设定MaxOD前仪器将50.0-100.0g/L的IgG均测定约为50.0g/L。而设定MaxOD后，仪器在大于50.0g/