实验二722型分光光度计的性能检查..docVIP

实验二 722型分光光度计的性能检查 目的 了解722型分光光度计的性能 熟悉仪器的技术指标及一般检查方法 掌握仪器的正确使用方法 原理 722型分光光度计是采用单光束自准式光路，色散元件为衍射光栅，能在近紫外，可见光谱内对样品进行分析，根据被测物质在可见光区范围内（360~800nm）吸收特性及吸光的程度（吸光定律：A=-lgT=εbc）对物质进行定性和定量测定的仪器。 为保证分析的灵敏度和准确性，国家计量局规定：对仪器应定期进行检查，检查周期为一年。 检查的主要技术项目有：仪器外观、波长精密度和重型、分辨率、吸收值精密和仪器的线型范围。对于符合闭耳定律的溶液测量时溶液的浓度与吸光值之间有良好的线性；一套比色皿之间应互相匹配以及仪器的绝缘等。上述各项性能应符合仪器所规定的技术指标（见操作步骤），本实验采用规定方法对上述各项目进行检查。 K2Cr2O7标准溶液：1mg?ml-1 CoCl2标准溶液：10mg?ml-1 CuSO4标准溶液：10mg?ml-1 0.1mol/LHCl 0.05mol/LH2SO4 4只比色皿、10支10ml比色管、1支2ml移液管和4支10ml移液管 实验步骤 仪器外观检查 仪器所有紧固件应紧固良好，各调节器能正常工作，仪器之余平稳工作台上操作时不得有摆动现象，比色皿座应推动自如，无松动、卡住的现象。光束透过各透光孔应畅通无阻。 仪器所配比色皿的透光面应光洁，无表面刮痕、擦毛和斑点，任何一面不得有裂纹。 波长精度的检查 在波长标度上的波长标度值误差，应符合以下规定： 波长范围 420～500nm 510～600nm 610～700nm 允许误差 ≦±3nm ≦±5nm ≦±6nm 检查方法：使用仪器配备的镨钕玻璃片，该片对不同波长的光透光率不同。在分光光度计上测定其透光率－波长曲线，从曲线上找出镨钕玻璃片的透光率峰值，则该仪器的波长误差Δλ＝λ－λ0。 Δλ=± 2nm λ0等于529nm（或808nm） 线型误差的检查 在吸光度为0.1～0.8（透光率为80％～16％）的范围内，将符合比耳定律的溶液进行测定，在不同的吸光度值范围测量溶液浓度的线型误差应符合以下规定： 吸光度范围 0.1～0.3 0.3～0.6 0.6～0.8 线性误差 ≦±6％ ≦±3％ ≦±4％ 检查方法：配制K2Cr2O7；CoCl2；CuSO4溶液，每种溶液配置以下三个浓度： 溶液名称 溶液浓度（×103μg?ml-1） 测定波长 备注 K2Cr2O7 0.0300 0.0900 0.150 440nm 浓度以Cr计量 CoCl2 2.00 6.00 10.00 510nm 浓度以Co计量 CuSO4 2.00 6.00 10.00 690nm 浓度以Cu计量 以重蒸馏水为空白，用仪器分别测量以上各个溶液的吸光度，每一浓度的溶液必须重复测量3次，取其平均值。将记录的吸光度与对应浓度，按下列公式计算各点的线性误差。 C1K＝A1’； C2K＝A2’； C1K＝A3’ 式中：C1、C2 、C3是同一种溶液的三个浓度；A1、A2、A3是测得的相应的吸光度 灵敏度的检查 仪器的灵敏度是度变化值与相应溶液浓度变化值之比，其比值应符合下表规定： 溶液名称 灵敏度（A/μg?ml-1） 测定波长 K2Cr2O7 ≥0.012/3 440nm CoCl2 ≥0.014/200 510nm CuSO4 ≥0.014/200 690nm 检查方法：配制如下浓度的溶液： 溶液名称 溶液浓度（×103μg?ml-1） 测定波长 备注 K2Cr2O7 0.0300与0.0330 440nm 浓度以Cr计量 CoCl2 2.00与2.20 510nm 浓度以Co计量 CuSO4 2.00与2.20 690nm 浓度以Cu计量 在指定波长下分别测量各溶液吸光度，设每种溶液的两个浓度间变化值为ΔC，测得的相应的吸光度为ΔA，则灵敏度S=ΔA/ΔC。 重现性检查 仪器在同一工作条件下，用同一种溶液连续重复测定7次其吸光度最大读数与最小读数之差不应大于0.5% 检查方法，将波长固定在690nm，用含Cu 2.00×103μg?ml-1硫酸铜溶液连续测定7次，计算其吸光度最大读数与最小读数之差。 吸收池（比色皿）匹配性的检查 在同一波长下，配套使用的吸收池之间透光率之差要求不大于0.5%。 检查方法：将波长固定在440nm，用含Cr 0.0300×103μg?ml-1的K2Cr2O7溶液分别注入一套吸收池，将其中一只推入光路中，调节至95%（T值可选小于100%而又尽量大的任一值），然后将各吸收池