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* 先端物性測定実習I 質量分析2 エレクトロスプレーイオン化法 （ESI - Ion Trap） 2010年度 前期（月曜3限～5限） 担当：高山?野々瀬?川畑 注射針先端に大きな電場勾配が生じ、 静電気力が表面張力に打ち勝って、 溶液が荷電液滴となって大気中に放出される。 シリンジポンプによって、流量5～20μl/minで 希薄溶液が注射針に送られる。 注射針には周囲の電極に対して 3～5ｋVの電位が印加される。 エレクトロスプレーイオン化法の原理 エレクトロスプレーイオン化法（ESI）とは、 生体分子?有機分子を非破壊的に、 溶液中から真空中へ導入するソフトなイオン化法である。 大きな分子量を持ち、不揮発性で電荷を帯びる分子の 質量分析にはきわめて有用である。 ＋ － ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ － － － － － － － ＋ ＋ ＋ 高圧電源 ３－５ｋV ＋ － 電子 電子 酸化 還元 エレクトロスプレーイオン化法の原理図 ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ Taylor　コーン 対極板 注射針 シリンジより 送られてきた 試料溶液 ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ このような分裂過程が繰り返される。 最後には孤立した分子イオンが生成される。 液滴表面から溶媒分子が蒸発。 溶媒の蒸発に伴って液滴のサイズが減少し　　　　液滴表面の電荷密度が増大。 静電反発力が表面張力よりも大きくなると、 荷電液滴はより小さなサイズの液滴にクーロン分裂。 荷電液滴から孤立分子イオンの生成 蛋白質は20種類のアミノ酸から構成される 酸性溶液中にある蛋白質では、 リシン、ヒスチジン、アルギニンのR基 およびN-末端のアミノ基にプロトンが付加する。 エレクトロスプレーイオン化法（ESI)を用いた質量分析装置を用いて、 蛋白質多電荷イオンのマススペクトルを測定する。 ESIによって蛋白質をイオン化すると 多数のプロトンが付加した多電荷イオンが生成される。 蛋白質多電荷イオンの質量分析 H + H + H + H + H + H + H + H + H + H + H + H + Cytochrome cのマススペクトル 12231.5amu N-H結合をレナード-ジョーンズ?ポテンシャルと仮定すると、次の式であらわされる。 ここで、rはN原子とH原子との間の距離(核間距離)である。 化学結合は近距離力 蛋白質多電荷イオンの構造を球だと仮定する。 半径aの球の内部に電荷Zeが一様に分布しているとする。 その場合のクーロンポテンシャルは、次の式であらわされる。 N - H + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + クーロン力は遠距離力 + N-H結合のレナード-ジョーンズ?ポテンシャルと 蛋白質内の電荷によるクーロンポテンシャルを 足し合わせたもの + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + N - + H ペプチド アンジオテンシン I (angiotensin I ) 蛋白質 ヘモグロビン (hemoglobin) リゾチーム (lysozyme） リゾチーム [S-S結合の解離したもの] 試料溶液 試料濃度　1～10μg/ml 溶媒　メタノール　+　純水（1％）　+　酢酸（0.1～1％） 実習に用いる試料 Hemoglobinとは?? ヘモグロビン（hemoglobin）とは、ヒトを含む全ての脊椎動物や 一部のその他の動物の血液中に存在する赤血球の中にある蛋白質である。 酸素分子と結合する性質を持ち、肺から全身へと酸素を運搬する役割を担っている。 赤色素であるヘムをもっているため赤色を帯びている。 成人のヘモグロビンはαサブユニットとβサブユニットと呼ばれる 2種類のサブユニットそれぞれ２つから構成される四量体構造をしている。 各サブユニットはグロビンと呼ばれるポリペプチド部分と 補欠分子族である1つのヘム部分が結合したもので、 分子量は１個あたり