《实验一、二培养基配制与微生物测定与观察小学期实验.docVIP

实验 培养基的配制 一、 ?实验目的 了解 2、掌握培养基配制的一般方法和步骤。 3、掌握灭菌方法。 ? 实验原理 培养基是供微生物生长、繁殖、代谢的混合养料。由于微生物具有不同的营养类型，对营养物质的要求也各不相同，加之实验和研究的目的不同，所以培养基的种类很多，使用的原料也各有差异，但从营养角度分析，培养基中一般含有微生物所必需的碳源、氮源、无机盐、生长素以及水分等。另外，培养基还应具有适宜的pH值、一定的缓冲能力、一定的氧化还原电位及合适的渗透压。 琼脂是从石花菜等海藻中提取的胶体物质，是应用最广的凝固剂。加琼脂制成的培养基在98～100下融化，于45以下凝固。但多次反复融化，其凝固性降低。 任何一种培养基一经制成就应及时彻底灭菌，以备纯培养用。一般培养基的灭菌采用高压蒸汽灭菌。 牛肉膏 3.0 g 蛋白胨 10.0g NaCl 5.0g 水 1000mL pH 7.4-7.6三、?材料 器皿及材料 天平、称量纸、牛角匙、精密pH试纸(pH 5.5~9.0)、量筒、刻度搪瓷杯、试管、三角瓶、移液及、培养皿、玻璃棒、烧杯、试管架、剪刀、酒精灯、、线绳、灭菌锅、干燥箱。 药品试剂? 蛋白胨、牛肉膏、NaCl、琼脂、1 mol/LNaOH1mol/LHCl等。 ?流程 称药品→溶解→调pH值→融化琼脂→过滤分装→包扎标记→灭菌→倒平板。 步骤 NaCL 放人烧杯中。牛肉膏常用玻棒挑取，放在小烧杯或表面皿中称量，用热水溶化后倒入烧杯，也可按在称量纸上，称量后直接放入水中，这时如稍微加热，牛肉膏便会与称量纸分离，然后立即取出纸片。 蛋白胨很易吸湿，在称取时动作要迅速。另外，称药品时严防药品混杂，一把牛角匙用于一种药品，或称取一种药品后，洗净，擦干，再称取另一药品。瓶盖也不要盖错。 2、溶化 在上述烧杯中先加入少于所需要的水量，用玻棒搅匀，然后，在石棉网上加热使其溶解。将药品完全溶解后，补充水到所需的总体积，如果配制固体培养基时，将称好的琼脂放入己溶的药品中，再加热溶化，最后补足所损失的水分。 在琼脂溶化过程中，应控制火力，以免培养基因沸腾而溢出容器。同时．需不断搅拌．以防琼脂糊底烧焦。配制培养基时，不可用铜或铁锅加热溶化，以免离子进入培养基中，影晌细菌生长。 3、调 pH 在未调 pH 前，先用精密 pH 试纸测量培养基的原始pH，如果偏酸，用滴管向培养基中逐滴加入 1mol/L NaOH,边加边搅拌，并随时用 pH 试纸测其 pH，直至 pH 达 7.4-7.6。反之，用 1mol/L HCI进行调节。 对于有些要求 pH 较精确的微生物，其 pH 的调节可用酸度计进行。 pH 不要调过头，以避免回调而影响培养基内各离子的浓度。配制 pH 低的琼脂培养基时，若预先调好 pH 并在高压蒸气下灭菌，则琼脂因水解不能凝固。因此，应将培养基的成分和琼脂分开灭菌后再混合，或在中性 pH 条件下灭菌，再调整 PH。 4、过滤 趁热用滤纸或多层纱布过滤，以利某些实验结果的观察。一般无特殊要求的情况下可以省去（ 本实验勿需过滤）。 5、分装 按实验要求，可将配制的培养基分装入试管内或三角烧瓶内。 （1）液体分装：分装高度以试管高度的 l／4 左右为宜。分装三角瓶的量则根据需要而定，一般以不超过三角瓶容积的一半为宜，如果是用于振荡培养用，则根据通气量的要求酌情减少；有的液体培养基在灭菌后，需要补加一定量的其他无菌成分，如抗生素等，则装量一定要准确。 （2）固体分装：分装试管，其装量不超过管高的 1/5，灭菌后制成斜面。分装三角烧瓶的量以不超过三角烧瓶容积的一半为宜。 分装过程中，注意不要使培养基沾在管(瓶)口上，以免引起污染。 6、?包扎标记 用棉绳系好等。 将上述培养基在 121℃条件下，高压蒸气灭菌20min。 8、倒平板 将需倒平板的培养基，倒平板。 将灭菌培养基放人 37℃的温室中培养 24—48h，以检查灭菌是否彻底。 六、实验报告 1．实验结果及讨论 针对实验原理、步骤、现象进行讨论。 2、思考制备培养基的一般程序是什么？ 做过本次实验后，你认为在制备培养基时要注意些什么问题？ ?如何检查灭菌后的培养基是无菌的 (4)?高压蒸汽灭菌时应注意哪些事项？ 一、目的要求/L 　　1 　　2 　　3 二、基本原理 　　37℃温度下培养，1—2天内每一菌体即能通过很多次细胞分裂而进行繁殖，形成一个可见的细胞群体的集落，称为菌落。每一种细菌所形成的菌落都有它自己的特点，例如菌落的大小，表面干燥或湿润、隆起或扁平、粗糙或光滑，边缘整齐或不整齐，菌落透明或半透明或不透明，颜色以及质地疏松或紧密等。因此，可通过平板培养来检查环境中细菌的数量和类型。 三、器材 肉膏蛋白胨琼脂平板，无菌水，灭菌涂布棒，移液器和枪头、试管架，