生化實验VC测定实验报告.docxVIP

实验报告课程名称：生化实验B 实验日期：班级 姓名学号： 维生素C定量测定2,6-二氯酚靛酚法背景及目的　抗坏血酸(维生素C)是活性很强的物质,在机体内起着抗氧化剂的作用,并维护血管、肌肉、骨骼、牙齿的正常生理功能,激活抗体的形成,白细胞的吞噬,抑制细菌的毒性,增大机体的抗病能力,增强大脑中氧的含量,激发大脑对氧的利用,促进生血机能,帮助铁的吸收,叶酸的利用。近年来已报道的测定维生素C(VC)含量的方法众多,遗憾的是一般的方法灵敏度低、仪器复杂、操作烦琐。据查资料得知现在普遍采用光度法、荧光法、色谱法、电化学分析法等实验方法,实验结果比较准确。但限于实验室条件及教学要求，本次实验采用2,6-二氯酚靛酚法来测定桔皮和桔肉的VC含量。要求学习定量测定维生素C的原理和方法；掌握微量滴定法的基本操作技术；了解蔬菜水果中维生素C的含量。实验原理维生素Ｃ又叫抗坏血酸，是一种水溶性维生素。在所有维生素中，维生素Ｃ是最不稳定的。在贮藏，加工和烹调时，容易被破坏。它还易被氧化和分解。维生素C属于水溶性维生素，分布广泛，其化学本质为不饱和的己糖内酯化合物，有L型和D型两种异构体，只有L型有生理作用。新鲜的水果和蔬菜中含有丰富的VC，如橙子、西红柿、猕猴桃、辣椒等尤为丰富。植物中含有抗坏血酸氧化酶，能将VC氧化为二酮古洛糖酸而失去活性，所以贮存久的蔬菜水果中含量会大量减少。如果人缺少维生素C将会患坏血病，如皮肤损伤及血管变脆等引起的牙龈出血等。维生素C具有很强的还原性。它可分为还原性和脱氢型，还原型抗坏血酸能还原染料2,6-二氯酚靛酚（DCPIP），本身则氧化为脱氢型抗坏血酸。在酸性溶液中，2,6-二氯酚靛酚呈红色，还原后变为无色 。一旦溶液中的维生素C已全部被氧化时，则滴下的染料立即使溶液变成粉红色。所以，当溶液从无色变成微红色时即表示溶液中的维生素C刚刚全部被氧化，此时即为滴定终点。根据染料消耗量即可计算出样品中还原型抗坏血酸的含量。仪器与试剂、材料1、仪器⑴离心机⑵ 托盘天平（含砝码）、托盘天平（平衡离心管用）⑶ 移液枪 ⑷ 容量瓶（100ml）一个 ⑸ 玻璃棒 ⑹ 烧杯（50ml）3个 ⑺ 吸管一个 ⑻ 研钵 ⑼ 三角瓶3个⑽ 微量滴定管一个2、试剂⑴ 2％草酸溶液⑵ 标准抗坏血酸溶液（0.2mg/ml）取抗坏血酸50mg溶于2％草酸稀释至250ml，冰箱保存。⑶2,6-二氯酚靛酚钠溶液: (0.001N)称取干燥的2,6-二氯酚靛酚钠60mg，加蒸馏水100-150ml，滴加0.01N NaOH 4-5滴，放入200ml容量瓶中，强烈震摇十分钟，冷却后加水至刻度，摇匀后用滤纸过滤于棕色瓶中，贮于冰箱中备用。3、材料桔子（用桔皮及桔肉）操作步骤用托盘天平称取桔肉10g，先称取然后去掉膜，放在研钵中，加少量石英砂研磨成匀浆。（另一组同学称取2g桔皮做研磨，同一个桔子）用2％草酸溶液将匀浆洗入离心管，实际用草酸溶液40ml左右。用自来水配重。将两个离心管放入离心机中，3500转/分，离心15分钟，将上层清液转入100ml容量瓶中，并用2％草酸溶液定容，制成样品溶液。（另一组同学制成桔皮做的样品液，两组交换使用）标准溶液测定向微量滴定管中加入2,6-二氯酚靛酚钠溶液并调零。取2ml标准抗坏血酸溶液加入8ml2％草酸溶液置于50ml三角瓶中，用2,6-二氯酚靛酚钠溶液滴定至粉红色，并在15S内不退色，即为滴定终点，记下用的染料量。平行滴定三次。样品的测定吸取桔肉样品溶液10ml，放入50ml三角瓶中，立即用2,6-二氯酚靛酚钠溶液滴定至出现明显的粉红色并在15S内不退色为止。记录所用的染料体积。重复三次取平均值。用同样的方法测定桔皮样品液，重复三次取平均值。测定过程必须迅速，不能超过2分钟，因为在本滴定条件下，一些非维生素的还原物质还原作用交迟缓，快速滴定可以避免或减少他们的影响。空白测定吸取2％草酸溶液10ml，放入50ml三角瓶中，用2,6-二氯酚靛酚钠溶液滴定至终点，记录所用的染料体积，重复三次取平均值。数据整理与计算实验时记录数据如下表格项目平行测定平均值123滴定空白所消耗的染料（ml）　0.05　0.05　0.06　0.053滴定标准所消耗的染料（ml） 　2.67　2.65　2.65　2.657滴定桔皮样液所消耗的染料（ml） 　2.05　2.06　2.05　2.053滴定桔肉样液所消耗的染料（ml） 　1.75　1.71　1.72　1.727 表1注：以上数据，除空白的三组外，其余的每组数据测量时，微量滴定管均是从0开始滴定。计算公式如下维生素C含量（mg/100 g样品）＝（V1－V2）×K×V×100V3×W K=式中：W-称取样品重（克）V0—标定染料时滴定