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免 疫 酶 技 术 基 本 原 理 免疫标记技术（immunolabelling technique）:是指用荧光素、放射性同位素、酶、发光剂或电子致密物质等作为示踪剂，标记抗体或抗原进行的抗原抗体反应。 特点：高度灵敏、特异、快速，定性、定量、定位 分类：免疫酶技术、免疫荧光技术、放射免疫技术、免疫电镜技术、免疫胶体金技术和发光免疫测定。 免疫酶技术：是利用酶标记抗体或抗原，以检测相应抗原或抗体的一种免疫学标记技术。 ELISA方法检测人血清中IgG 酶联免疫吸附试验（enzyme linked immunosorbent assay, ELISA） 是一类常用的免疫酶技术。是将已知的抗原或抗体吸附在固相载体表面，使抗原抗体反应在固相表面进行。 常用的酶：辣根过氧化物酶 底物为邻苯二胺 常用的方法：间接法、双抗体夹心法和抗原竞争法。 . ???????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????? Indirect ELISA antigen Specific antibody Enzyme-marked antibody colourlesssubstrate Color products ? Sandwich Complex Solid Phase antibody antigen Enzyme conjugated antibody Sandwich ELISA Sandwich ELISA Chromogenic enzyme substrate Color products ? ? Reaction Product Antigen Enzyme-labeled Antigen Competitive ELISA Competitive ELISA Chromogenic enzyme substrate Color products 双抗体夹心法：用于检测特异抗原。将已知抗体包被固相，加入待检标本，标本中含有相应抗原即与固相上的抗体结合，洗涤去除未结合成分，加入该抗原特异的酶标记抗体，加底物显色。 目的： * 掌握ELISA技术 * 检测血清中IgG含量 材料： 抗人IgG抗体（羊抗人IgG抗体）（一抗） 已知IgG含量的参考蛋白（作标准系列） 待检人血清 辣根过氧化物酶标记的抗人IgG抗体（二抗） 包被液：PH9.6 0.05mol/L碳酸盐缓冲液 洗涤液：PH7.4 0.01mol/L PBS 底物溶液：OPD-H2O2 终止液：2mol/L H2S04 酶标反应板（一排/人） 操 作 步 骤 包被（用一抗包被）、封闭 （已做） 洗涤3次 加样：将已知含量的参考蛋白IgG倍比稀释7孔，第8孔加待检血清、第9孔加阴性对照，第10孔作空白对照（100ul/孔）。 100ul 稀释液 待测血清 空白 100ul 标准品 100ul 100ul 阴性对照 孵育（37℃ 30min） 洗涤3次 加酶标记的抗人IgG抗体（即二抗）(100ul/孔) 孵育（37 ℃ 30min） 洗涤3次 显色（加底物溶液，100ul/孔 。室温避光15-30min） 2M H2SO4 50ul/孔 终止反应 检测(490nm波长下检测) 结果观察与分析： 空白对照应无色； 阳性孔呈棕黄色， 标准系列各孔呈明显的颜色深浅梯度； 绘制标准曲线。 注意事项： 做倍比稀释时，应从高浓度到低浓度； 显色时一定避光； 检测时应避免孔中有气泡。 人有了知识，就会具备各种分析能力， 明辨是非的能力。 所以我们要勤恳读书，广泛阅读， 古人说“书中自有黄金屋。 ”通过阅读科技书籍，我们能丰富知识， 培养逻辑思维能力； 通过阅读文学作品，我们能提高文学鉴赏水平， 培养文学情趣； 通过阅读报刊，我们能增长见识，扩大自己的知识面。 有许多书籍还能培养我们的道德情操， 给我们巨大的精神力量， 鼓舞我们前进。 * The amount of immobilized protein is determined following the principle of a indirect ELISA: The first step is the physisorption of the protein on the biomaterial surf