内皮抑素的低分子肝素修饰及对兔角膜新生血管的抑制作用.docVIP

内皮抑素的低分子肝素修饰及对兔角膜新生血管的抑制作用 【摘要】nbsp; 目的 探讨利用低分子肝素对内皮抑素进行结构修饰，并评价其对角膜新生血管(corneal neovascularization，CNV)的抑制作用。方法 采用化学方法用低分子肝素修饰内皮抑素，碱烧伤法建立兔角膜新生血管模型，分别在球结膜下注射低分子肝素化内皮抑素（Ⅰ组）、内皮抑素（Ⅱ组）和生理盐水（对照组），观察新生血管的生长情况。结果 成功的利用低分子肝素对内皮抑素进行了结构修饰，动物实验表明Ⅰ组新生血管的长度、面积、数量、VEGF的表达均明显低于其它两组，差异有统计学意义（Plt;0.05）。结论 低分子肝素化内皮抑素可有效抑制角膜新生血管的生长，效果优于内皮抑素。 【关键词】nbsp; 低分子肝素 内皮抑素 修饰 角膜 新生血管 兔 nbsp;nbsp;nbsp; its angiogenesis effects on rabbit corneas nbsp;nbsp;nbsp;nbsp; Abstract: Objectivenbsp;nbsp; To investigate the modification of endostatin (ES) with low molecular weight heparin (LMEH) and its inhibitory effects on corneal neovascularization（CNV）. Methodsnbsp;nbsp; ES was modified with LMWH by a chemical method. The rabbit CNV model was made with alkali burning. LMWHES(group 1)， ES (group 2) and normal saline(control group) were subconjunctivally injected. Resultsnbsp; The blood vessel was shorter and smaller in group 1 than innbsp; the other two groups(Plt;0.05) and the expression of VEGF in group 1 was also significantly lower than that of the other two groups(Plt;0.05). Conclusionsnbsp;nbsp; LMWHES can effectively inhibit the growth of CNV and is superior to ES. nbsp;nbsp;nbsp; Key words: Low molecular weight heparin; Endostatin; Modification; Cornea; Neovascularization; Rabbit nbsp;nbsp;nbsp; 找一种效果更佳的内皮抑素修饰物。 nbsp;nbsp;nbsp; 1nbsp; 资料与方法 nbsp;nbsp;nbsp; 1.1nbsp; 材料nbsp; 含内皮抑素基因的重组表达载体工程菌（山东大学免疫学研究所）； LMWH（50 antFXa u/mg，中国烟台东诚生化有限公司）； 健康成年新西兰白兔30只（山东大学动物实验中心），体重2.0 2.5?kg，雌雄兼有，眼部无异常。 nbsp;nbsp;nbsp; 1.2nbsp; 方法 nbsp;nbsp;nbsp; 1.2.1nbsp; LMWH对ES的化学修饰nbsp; 采用毕赤酵母表达系统，按照文献［4］的方法进行内皮抑素蛋白的表达，分离纯化后得到电泳单点纯的内皮抑素。采用高碘酸氧化法活化LMWH，制得LMWH活化液，于pH 9.5、0.3?mol/L的NaCO- NaHCO3缓冲液中对内皮抑素进行化学修饰。通过SDSPAGE电泳监测修饰反应过程，比较不同时间点修饰液的自由氨基修饰率、活性保留百分率。测定ES及LMWHES在25?℃和37?℃水浴中的热稳定性。 nbsp;nbsp;nbsp; 1.2.2nbsp; LMWHES及ES对兔角膜碱烧伤后新生血管抑制作用的观察nbsp; 30只兔用氯胺酮（25?mg/kg）及氯丙嗪（25?mg/kg）诱导全麻，将浸润1?min的1?mol/L氢氧化钠滤纸片置于兔右眼角膜中央30?s，然后立即用20?ml BBS冲洗烧伤区及结膜囊1?min建立实验模型。 nbsp;nbsp;nbsp; 随机将兔