細胞生物学翻译.docVIP

通过细胞间的附着作用调节细胞内的PH S.I. Galkina G.F. Sudina， G.B. Dergacheva ， L.B. Margolis A. N. Belozersky Institute of Physico-Chemical Biology of Moscow State University, Moscow 119899, Russian Federation Laboratory of Theoretical and Physical Biology, NICHD, NIH, Bethesda. MD 20892,USA Received 4 August 1995 摘要 正如我们之前所叙述的工作，人工培养的纤维母细胞内的PH取决于细胞的安度。在单细胞里pH低，而在多细胞里较高，在一个稀疏的单层细胞中形成细小的和极大的群落。在另一方面，在单层与单层的交界区域中pH低。现在的工作中，我们展示的是在信号转导途径中各种PH控制机制的抑制剂和关键酶抑制因子的影响取决于局部细胞的密度。我们发现细胞间的相互作用诱导那被认为是V-type ATP酶的N-ethylmaleimide 和 7-chloro-4-nitrobenz-2-oxa-l,3-diazole抑制pHi的升高;同时抑制H传导路径的Cd离子引起单层交界处pH的升高。我们的数据也显示在细胞间相互作用调节pH中逆向转导并没有起到本质上的作用。 磷脂酶(4-bromophenacyl-bromide)，磷脂酶C和蛋白激酶C (H-7)的抑制剂改变局部细胞密度调节pH i的方法。这说明细胞间的相互作用是在磷脂酶A2的完全控制和蛋白激酶C的负控制下通过pHi的调整来调节细胞的活动。 关键词：细胞内pH；细胞间相互作用；磷脂酶A2；蛋白质酶C；H-ATP酶；Na/H逆向转导；H-电导 引言 许多细胞的功能都是通过细胞间的相互接触。在细胞里局部环境里细胞数量和细胞行为的影响的机制知识是有待阐明的。之前我们已经说到人工培养的纤维母细胞和其附着的中性粒白细胞中的pHi是依靠细胞与其邻近细胞的相互附着作用和假设通过pHi的调整细胞间的相互作用可以影响细胞质中各种生物化学反应。细胞内的pH的改变是从细胞表面附着受体到细胞内部的信号转导路径所引起的。我们最近的工作是检查关键酶的介入信号转导，如磷脂酶C，磷脂酶和蛋白激酶C通过细胞间的作用来调节pH。这些工作的目的也是为了阐明已知的pHi调节机制有助于通过细胞单元接触来调整pH。 材料和研究方法 2.1材料 牛小腿血清，乳白蛋白水解液和从Institute of Poliomyelitis (Moscow)获得的伊格尔培养基。游离碳酸氢根离子Hanks溶液，N-乙马来酰亚胺，阿米洛利，phorbol-12- myristate-13-acetate (PMA), l-(5-isoquinolinylsulfonyl)-2-methyl- piperazine (H-7)，bafilomycin , CI-NBD, 4-bromophenacyl bromide,新霉素，从Sigma购买的尼日利亚菌素。对于Acetomethyl ether of 2,7-bis(2carboxyethyl)-5,(6)-carboxyfluorescein (BCECF)的pH测量是从Molecular Probes获得。 2.2.细胞培养 人的纤维母细胞是生长在包含45%伊格尔培养基，45%乳白蛋白水解液和10%牛小腿血清的中间物中。为了获得一个融合单层，细胞被放置在高密度（10cells/ml）中，然后培养4-5天直至融合。然后培养基是“受伤的”：一部分单层被机械移除各培养基要被另外培养2-3天。在这段时间里细胞已从单层的边缘移动到下层的自由区域和形成各种细胞密度的区域：（i）单细胞没有相互接触；（ii）多数细胞，与邻近的几个细胞相互接触；（iii）细胞在伤口的边缘形成一个松散的单层；（iv）细胞在融合的单层中。在测量pHi一个小时前，将介质改为用10mM HEPES(pH7.30)缓冲的游离碳酸氢盐Hanks溶液和测量pH。根据其特殊作用按各种药物的最佳浓度进行加入。在装有DMSO的培养基中加入阿米洛利（10/μM）10min或1h,控制培养有细胞的Hanks溶液中加入DMSO溶液相应的数量。为了影响HATP酶细胞，将其放到含有100/μM， C1-NBD, 100/μM ，NEM 和1/μM巴弗洛霉素的Hanks溶液中培养20min。为了影响PLA2，细胞放在含有20μΜ 4-bromophenacyl bromide的Hanks溶液中培养20min。为了调节PK