第11章色谱分析法概论新.pptVIP

第11章 色谱分析法概论 11.1 概述 11.2 色谱法基础知识 11.3 色谱分离的基本理论 11.4 色谱法的发展趋势 11.1概述11.1.1色谱法的起源和发展 1906年俄国植物学家茨维特 (M.Tswett) 从分离植物色素实验中发明了色谱分离方法。 11.1概述11.1.1色谱法的起源和发展 1906，俄国植物学家 M.Tswett 发明色谱法，是色谱之父。 1931，对液固吸附色谱的杰出贡献者库恩，分离出60多种胡萝卜素，核黄素、维生素，获1938年诺贝尔化学奖。 蒂塞利乌斯(Tiselius)因电泳分析方法的研究，发现血清蛋白组分，获1948年诺贝尔化学奖。 1941，马丁(Martin)和辛格(Synge)创始分配色谱特别是纸色谱而共获1952年诺贝尔化学奖。 氨基酸自动分析仪发明人S·穆尔(Stanford Moore)和W.H.斯坦(William Howard Stein),定量分析方法解决了有关氨基酸、多肽、蛋白质等复杂的生物化学问题，获1972年诺贝尔化学奖。 11.1概述 11.1.2色谱法的定义与分类 11.1概述 11.1.2色谱法的定义与分类 11.1概述 11.1.2色谱法的定义与分类 11.2 色谱法基础知识 11.2.1 色谱过程 11.2.2 色谱法基本术语 11.2.3 色谱法分类 11.3.4 色谱基本类型的分离机理 11.2 色谱法基础知识11.2.1色谱过程 吸附色谱过程的实质：色谱过程是吸附与解析的过程；不同组分极性的差异导致吸附与解析的差异；不同组分向前移动的过程是差异不断累积过程，是在动态中由量变到质变的过程。 11.2 色谱法基础知识11.2.3 基本术语 11.2 色谱法基础知识11.2.3 基本术语 11.2 色谱法基础知识11.2.3 基本术语 11.2 色谱法基础知识11.2.3 基本术语 11.2 色谱法基础知识11.2.3 基本术语 11.2 色谱法基础知识11.2.3 基本术语 11.2 色谱法基础知识11.2.3 基本术语 设色谱峰为正常峰，且W1≈W2，(W1+W2)/2=4σ。若Rs=1，峰尖距为4σ，两峰略有重叠；若Rs=1.5，峰尖距为6σ，两峰完全分开。一般规定两相邻峰的Rs≥1.5作为色谱峰达到分离的指标。 分离因子仅仅反映两个组分的热力学参数相比较的关系，与色谱动力学参数(如峰宽)无关，不能作为完全分离的指标；分离度是两组分的热力学参数保留时间(差值)与动力学参数峰宽(平均值)的比值，可作为完全分离的指标。 11.2 色谱法基础知识11.2.4 色谱基本类型的分离机理 以固体吸附剂为固定相，利用被分离组分对固定相表面吸附活性中心吸附能力的差别为实现分离。 11.2 色谱法基础知识11.2.4 色谱基本类型的分离机理 利用被分离组分在固定相或流动相中的溶解度差别而实现分离。固定相为涂渍在多孔惰性载体上的固定液，流动相可为气体或液体。 11.2 色谱法基础知识11.2.4 色谱基本类型的分离机理 以离子交换作用分离离子型化合物的液相色谱法。利用被分离组分的离子交换能力的差别而实现分离。固定相为离子交换剂，流动相为一定pH和离子强度的缓冲溶液。 11.2 色谱法基础知识11.2.4 色谱基本类型的分离机理 空间/分子排阻色谱法(SEC)：以凝胶为固定相。有机溶剂流动相—凝胶渗透色谱法；水溶液为流动相—凝胶过滤色谱法。 利用被分离组分分子大小的不同，在固定相上选择性渗透实现分离。 11.3 色谱分离的基本理论 11.3.1 影响保留行为的因素 11.3.2 等温线 11.3.3 塔板理论 11.3.4 速率理论 11.3.5 影响分离度的因素 11.3 色谱分离的基本理论11.3.1 影响保留行为的因素 11.3 色谱分离的基本理论11.3.2 等温线 11.3 色谱分离的基本理论11.3.2 等温线 对称因子/拖尾因子 完全对：fs=1.00 对称峰：fs=0.95~1.05 前延峰：fs＜0.95 (A＞B) 拖尾峰：fs＞1.05 (A＜B) 11.3 色谱分离的基本理论11.3.3 塔板理论 色谱柱是由一系列连续、等距的水平塔组成，在柱内每层塔板内部，组分能够在流动相和固定相两相中达到平衡。 流动相通过色谱柱呈间歇式前进运动，每次前进为一个塔板体积。 样品和流动相同时加在第一个塔板上，且样品垂直于前进方向的扩散(即纵向扩散)可以忽略。 分配系数在各塔板上是常数。 11.3 色谱分离的基本理论11.3.3 塔板理论 塔板理论的这些假设，实际上是把组分在两相间的连续转移过程，分解为间歇地在单个塔板中的分配平衡过程，经过多次分配平衡后，分配系数小的组分先达到塔顶(即挥发性