动植物油脂 单体固醇及总固醇含量的测定—气相色谱法.docVIP

中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 中国国家标准化管理委员会发布前 言 本标准等同采用国际标准ISO 122281999 《动植物油脂单体固醇及总固醇含量的测定——气相色谱法》(英文版)。 ISO 12228：1999一致，做了下列编辑性修改： ――本国际标准改为本标准； ――删除了国际标准的前言； 本标准起草人：本标准。分析实验室用水规格和试验方法7-燕麦甾烯醇7-燕麦甾烯醇0.5 mol/L氢氧化钾乙醇溶液：称取3g氢氧化钾先用5 mL水溶解，再用100 mL乙醇稀释（5.3），溶液应呈无色或淡黄色。 内标标准溶液：桦木醇(又称白桦酯醇)，1.0 mg/mL的丙酮溶液（见5.10的注意）。 注：在橄榄油渣的情况下可能包含桦木醇，可采用5-α-胆甾烷-320 cm×20 cm，薄层厚度0.25 mm。 展开剂：V(己烷)+ V(乙醚)=1+1。 薄层色谱用标准溶液：胆甾醇含量1.0mg/mL，桦木醇含量5.0mg/mL，称取一定量的胆甾醇和桦木醇溶于丙酮中。 喷显剂：甲醇。 硅烷化试剂：在N-甲基N-三甲基硅烷七氟丁酰胺 (MSHFBA)中加入50μL 1-甲基咪唑。 注:其它的甲硅烷基试剂不常使用，除非采用特别预防法保证桦木醇的两个羟基甲硅烷基化,否则在气液色谱分离时桦本醇可能会出现两个峰。 仪器设备 实验常规仪器，以及下列特殊的仪器。 圆底烧瓶：25 mL和50 mL，磨口。 回流冷凝器：磨口连接，与烧瓶（6.1）配套。 玻璃柱：具聚四氟乙烯活塞、烧结玻璃沙芯及100 mL的储液器，长25 cm，内径1.5 cm。 旋转蒸发器：附真空泵和水浴锅（保持在40℃）。 展开槽：由玻璃制造，具磨砂玻璃盖，可适合于规格为20 cm×20 cm的薄层板。 微量注射器或者微量加液器：100 μL。 烘箱，可保持在105℃± 3℃。 干燥器：加有有效的干燥剂用于储存薄层板。 反应瓶：容量0.3 mL，具螺丝帽和聚四氟乙烯(5.9)，直到甾醇和桦木醇区带在半透明（暗色）背景下呈现白色。桦木醇斑点略低于甾醇区带。标记下包括标准点高度上面2 mm及可见斑点区下面4 mm的区域（见图1）。用刀片完全地刮下标记的部分薄层，并定量地将硅胶收集于小烧杯中。 注：可见斑区下边缘采用较宽的范围（4mm，相对于上边缘采用2mm）是为了避免操作过程中桦木醇部分损失。葵花籽油可能显示三个带（?5-甾醇, ?7-甾醇和桦木醇）1:20； 检测器温度及进样口温度：320℃；柱温采用程度升温方式，以4℃/min的速度从240℃增加至255℃； 进样量是1μL。 也可采用其他等效的毛细管柱。 注2 用包含胆甾醇，菜油甾醇，豆甾醇和谷甾醇的标准溶液检查保留时间。用空白校正来自溶剂、玻璃壁，过滤器和指纹等可能带来的污染（如胆甾醇）。 结果表示 甾醇鉴定 通过测定相对保留时间(RRT)鉴别试样中的甾醇，相对保留时间(RRT)以待测甾醇的保留时间(RT)除以胆甾醇和（或）桦木醇的保留时间(RT)所得值表示。表1显示了用SE-54固定相分离时，不同甾醇相对于胆甾醇和桦木醇的相对保留时间。 注:表1中所列相对保留时间（在9.2.6 注1的条件下测得的）仅用于鉴别单个甾醇时参考，组分洗脱顺序如图2所示。真实的相对保留时间可能与表1中给的相对保留时间有略微偏差，因为相对保留时间取决于实验条件（气液色谱柱的类型和长度，升温程序，以及固定相的用量）。 甾醇组成 计算峰面积，甾醇含量(以质量分数表示,%)按下列公式(1)计算: ………………………………………(1) 式中： Ai——甾醇组分i的峰面积； ΣA——所有甾醇组分（峰1~峰16）的峰面积和。 单个甾醇的气液色谱峰鉴定和相对保留时间（固定相：SE-54） 峰 俗名 甾醇 RRTC RRTB 1 胆甾醇 胆甾基-5-烯-3β-醇 1.00 0.44 2 胆甾烷醇 5α-胆甾烷基-3β-醇 1.02 0.45 3 菜籽甾醇 [24S]-24-甲基胆甾基-5,22-二烯-3β-醇 1.09 0.48 4 24-亚甲基胆甾醇 24-亚甲基胆甾基-5,24-二烯-3β-醇 1.21 0.53 5 芸苔甾醇 [24R]-24-甲基胆甾基-5-烯-3β-醇 1.23 0.54 6 芸苔甾烷醇 [24R]-24-甲基胆甾烷基-3β-醇 1.25 0.55 7 豆甾醇 [24S]-24-乙基胆甾基-5,22-二烯-3β-醇 1.31 0.57 8 7-芸苔甾烯醇 [24R]-24-甲基胆甾基-7-烯-3β-醇 1.38 0.59 9 5,23-豆甾二烯醇 [24R,S]-24-乙基胆甾基-5,23-二烯-3β-醇 1.40 0.60 10 赤桐甾醇 [24S]-24-乙基胆甾基-5,25-二烯-3β-醇 1.4