【2017年整理】分子生物学C 自整.docx

Immunology based techniques: ELISA 酶联免疫吸附实验(ELISA) 即将已知的抗原或抗体吸附在固相载体表面，使酶标记的抗原抗体反应在固相表面进行的技术。该技术可用于检测大分子抗原和特异性抗体等，具有快速、灵敏、简便、载体易于标准化等优点。 基本原理: 它采用抗原与抗体的 HYPERLINK /view/2455857.htm 特异反应将待测物与酶连接，然后通过酶与 HYPERLINK /view/63162.htm 底物产生 HYPERLINK /view/1683376.htm 颜色反应，用于定量测定。测定的对象可以是抗体也可以是抗原。在这种测定方法中有3种必要的试剂：①固相的抗原或抗体（免疫吸附剂） ② HYPERLINK /view/3848542.htm 酶标记的抗原或抗体（ HYPERLINK /view/1494103.htm 标记物）③酶作用的底物（ HYPERLINK /view/1342816.htm 显色剂）测量时，抗原（抗体）先结合在固相载体上，但仍保留其免疫活性，然后加一种抗体（抗原）与酶结合成的偶联物（标记物），此偶联物仍保留其原免疫活性与酶活性，当偶联物与固相载体上的抗原（抗体）反应结合后，再加上酶的相应底物，即起催化水解或HYPERLINK /view/30896.htm氧化还原反应而呈颜色。其所生成的颜色深浅与欲测的抗原（抗体）含量成正比。 这种有色产物可用肉眼、光学显微镜、电子显微镜观察，也可以用分光光度计（酶标仪）加以测定。其方法简单，方便迅速，HYPERLINK /view/552529.htm特异性强。 特点: 灵敏性高:该测定法的灵敏度来自作为报告基团的酶。众所周知, 酶是一种有机催化剂，很少量的酶即可诱导大量的HYPERLINK /view/1590738.htm催化反应 ，产生可供观察的HYPERLINK /view/1012539.htm显色反应现象。因此该体系常被称为酶放大体系。ELISA实现了在细胞或亚细胞水平上示踪抗原或抗体的所在部位，或在微克、甚至纳克水平上对其进行定量。 特异性强:其特异性来自抗体或抗原的选择性。抗原抗体的结合实质上只发生在抗原的 HYPERLINK /view/116534.htm 抗原决定簇与抗体的 HYPERLINK /view/1136851.htm 抗原结合位点之间。由于两者在 HYPERLINK /view/2295205.htm 化学结构和空间构型上呈互补关系，所以 HYPERLINK /view/205328.htm 抗原抗体反应具有高度的特异性。 Immunohistochemistry 免疫组化，是应用免疫学基本原理—— HYPERLINK /view/20489.htm 抗原抗体反应，即抗原与抗体特异性结合的原理，通过化学反应使HYPERLINK /view/190475.htm标记抗体的HYPERLINK /view/1342816.htm显色剂（ HYPERLINK /view/2062542.htm 荧光素、酶、金属离子、HYPERLINK /view/1160.htm同位素）显色来确定组织细胞内抗原（多肽和蛋白质），对其进行定位、定性及相对定量的研究，称为HYPERLINK /view/1766442.htm免疫组织化学技术(immunohistochemistry)或 HYPERLINK /view/640785.htm 免疫细胞化学技术(immunocytochemistry)。 基本原理： 抗体和抗原之间的结合具有高度的特异性，免疫组织化学正是利用了这一原理。先将组织或细胞中的某种化学物质提取出来，以此作为抗原或半抗原，通过免疫动物后获得特异性的抗体，再以此抗体去探测组织或细胞中的同类的抗原物质。由于抗原与抗体的复合物是无色的，因此还必须借助于组织化学的方法将抗原抗体结合的部位显示出来，以其达到对组织或细胞中的未知抗原进行定性，定位或定量的研究。 免疫组织化学的临床应用主要包括以下几方面： ⑴恶性肿瘤的诊断与鉴别诊断； ⑵确定转移性恶性肿瘤的原发部位； ⑶对某类肿瘤进行进一步的病理分型； ⑷软组织肿瘤的治疗一般需根据正确的 HYPERLINK /view/79305.htm 组织学分类，因其种类多、组织形态相像，有时难以区分其组织来源，应用多种标志进行免疫组化研究对软组织肿瘤的诊断是不可缺少的； ⑸发现微小转移灶，有助于临床治疗方案的确定，包括手术范围的确定。 ⑹为临床提供治疗方案的选择。 Western Blotting 蛋白质印迹法（免疫印迹试验）即 HYPERLINK /view/555578.htm Western Blot。它是 HYPERLINK /subview/2461