活性炭对大别山野生兰花组培快繁影响的实验研究--精.doc

活性炭对大别山野生兰花组培快繁影响的实验研究 摘要：大别山野生兰花，兰花属，兰科，具有极高的观赏价值和经济价值。组织培养是大别山野生兰花快速繁殖的主要途径之一。活性炭具有较强的吸附作用。我们设计了三个以大别山野生兰花地下根状茎为外植体的组培实验，通过在培养基中添加不同浓度的活性炭，诱导根状茎出芽和幼苗生长。我们发现：适量的活性炭能加速根状茎长粗和多分枝，活性炭加入量以2g/L较好；当培养基中活性炭含量为2g/L情况下,提高BA或NAA的添加浓度,甚至将BA浓度提高近6倍均不能提高茎段的发芽率。在繁殖培养基中加入活性炭有利于提高成苗率，活性炭加入量以 0.5～3.0g/L活性炭的效果最佳。 关键词：大别山野生兰花，组织培养，根状茎，活性炭 前言 2007年2月每阳春三月，大别山区的大集小镇、街头巷尾、公路边上总会有不少或肩挑或车驮的卖野生兰花的人。他们从大别山区的深山老林里将兰花苗一棵棵连根挖起，然后运到小集市或大城市中贩卖。大别山中的大量野生兰花遭非法采挖。在目前的兰花市场上，兰花稀有品种的价格高达数十万元。在高额利润的刺激下，部分地区挖掘野生兰花达到了疯狂的程度，造成野生兰花濒危。 在不含活性炭的培养基中，茎段发芽率高达92.8%，而在加入不同浓度活性炭的培养基中，茎段发芽率很低，活性炭浓度超过4g/L时，几乎没有芽分化。 通过实验，我们发现加入适量的活性炭可以吸附培养过程中所产生的不利于细胞生长的物质如酚、醌类等，使组织生长更好，但浓度太高可能使有利于细胞生长的物质如生长调节剂等被吸附，从而影响大别山野生兰花根状茎的分化。 2.2 活性炭在不同生长调节剂浓度下对大别山野生兰花根状茎分化的影响 表2 不同 BA、NAA浓度下活性炭对根状茎芽分化的影响 BA(mg/L) NAA(mg/L) 接种数（个） 发芽数（个） 3.5 0.5 20 1 3.5 1.5 20 1 7.0 0.5 20 0 7.0 1.5 20 1 10.0 0.5 20 0 10.0 1.5 20 0 15.0 0.5 20 0 15.0 1.5 20 0 18.0 0.5 20 0 18.0 1.5 20 0 为了探明活性炭能否吸附培养基中的生长调节剂，而影响根状茎的分化结果，我们进行培养基添加不同浓度BA或NAA试验，结果见表2。从表2看出，当培养基中活性炭含量为2mg/L情况下，提高BA或NAA 的添加浓度，甚至将BA浓度提高近6倍均不能提高茎段的发芽率，说明活性炭并不是通过吸附培养基中生长调节物质而抑制分化的。大别山野生兰花根状茎芽分化受阻是否由于活性炭吸附了芽分化过程所需要的某种活性物质，有待进一步探讨。 2.3 不同浓度活性炭对大别山野生兰花幼苗生长的影响 表3 不同浓度活性炭对幼苗生长的影响 活性炭用量 （g/L） 接种个数（个） 单株鲜重增长率(%) 成苗数 （株） 株高 （cm） 成苗率 (%) 0 20 15.6 14 4.5 70 0.5 20 182.3 16 4.6 80 1.0 20 275.6 16 4.8 80 2.0 20 322.1 18 5.1 90 3.0 20 426.5 15 5.3 75 4.0 20 443.3 13 5.4 66 5.0 20 510.0 9 5.4 45 将已经分化的幼苗接种于不同浓度活性炭的繁殖培养基中，培养60天后，幼苗鲜重、株高和成苗率测定结果见表3。不添加活性炭处理幼苗鲜重增长较少，且由于代谢产物酚类的产生使得切口褐化越来越严重，不能长出根与叶。在加入活性炭的处理中，以2.0g／L处理效果最佳，其次为O.5g／L 和1.0g／L。随着活性炭浓度的升高，虽然植株鲜重增加了，却抑制了不定芽的生长，成苗率反而下降。不过活性炭对株高的影响不明显。说明活性炭在幼苗生长期是必要的，它吸附了培养基中的有害物质，使幼苗健康成长。 3 结论 通过以大别山野生兰花地下根状茎为外植体的三个组培实验，我们发现： 适量的活性炭能加速根状茎长粗和多分枝，活性炭加入量以2g/L较好。 当培养基中活性炭含量为2g/L情况下,提高BA或NAA的添加浓度,甚至将BA浓度提高近6倍均不能提高茎段的发芽率。 在繁殖培养基中加入活性炭有利于提高成苗率，活性炭加入量以 0.5～3.0g/L活性炭的效果最佳。 如何使大别山野生兰花根状茎大量分化出芽是快速繁殖成苗的关键。在大别山野生兰花根状茎快速繁殖的不同阶段，对活性炭的添加量做出正确的选择是至关重要的，至于活性炭对芽分化的抑制作用机理有待进一步研究。 参考文献： 致谢 鉴于我们的认识水平和实验手段