選修实验细菌培养技术.docVIP

实验三：学习细菌培养的基本技术 实验原理：①要根据微生物的营养需要，采用相应的配方配制培养基。 ②培养基除满足微生物所需各种营养外，还要适宜的pH值。本实验所用的牛肉膏蛋白胨培养基应用广泛，适于多种细菌的培养。 ④配置好的培养基必须经过灭菌，一般采用高压蒸汽灭菌。在整个细菌接种培养过程中，一般要求无菌操作。 方法步骤： 一、培养基的配制 称量 ? 溶化 ? 调pH值 ? 培养基的分装 ? 加棉塞 ? 包扎 加水加热 边滴边搅拌 趁热分装 棉塞长度2/3在内 外加牛皮纸 随时用测pH值 培养基高度为1/5 挂上标签 二、灭菌 高压蒸汽灭菌的效果是细菌培养的关键。 灭菌原理:依据高压升温使菌体细胞蛋白质凝固变性失去生命力,将0.11MPa、121oC,维持30min彻底灭菌 操作：加水、装料 ? 加热、排气 ? 升压、保压 ? 降压、排气 加开水适当,试管 打开排气阀,加热至沸腾 压力至0.11MPa,T为121oC 压力降至0, 口向上,不能太挤 排气5～10min,关闭 控制热源，保压30min T100oC开阀 三、搁置斜面 当T接近50oC，将试管摆在一根木棒上。培养基形成的斜面不超过试管总长度的一半。 四、接种 微生物接种的各项操作要求必须在无菌条件下进行。 ①设备的准备和消毒： 设备：无菌操作箱(无条件可直接在在酒精灯上)，接种环 双手 75％酒精消毒 熏蒸法或紫外灯灭菌 灼烧法消毒 ②采菌：点燃酒精灯?用左手并排拿起有菌种的试管和培养试管?靠近酒精灯火焰,旋松棉塞?右手拿接种环,在火焰上烧红灭菌?取下棉塞，并灼烧试管口一周?接种环伸入试管，挑去少量菌体，立即抽出 ③接种：迅速将接种环插入培养试管中?在斜面上由管底向管口连续轻划几道蛇形曲线 （画线要求：线要划密一些,不要划破培养基,不要使接种环接触到管壁或管口,不重复划） ?及时抽出接种环?将试管口在火焰上灼烧，塞上棉塞?熄灭酒精灯,菌种加热倒掉 五、保温培养 接种后，试管放在保温箱中，25oC下培养5～7天(37oC下培养24h) 练习： 一、选择题 1、下面对发酵工程中灭菌的理解不正确的是（ ） A、防止杂菌污染 B、消灭杂菌 C、培养基和发酵设备都必须灭菌 D、灭菌必须在接种前 2、制作细菌培养基时，pH值应调为（ ） A、4.5～6 B、7.4～7.6 C、7.8～8 D、2～4 3、下面的资料表明在各种培养基中细菌的生长（S、C、M为简单培养基，U、V、X、Y、Z代表加入培养基的不同物质），问哪一些物质细菌不能合成（ ） 培养基 S、C、M S、C、M+V+Z S、C、M+U+Y S、C、M+Z+X S、C、M+V+Y S、C、M+U+X S、C、M+Y+Z 生长状况 － － ＋ － ＋ － ＋ A、U B、V C、Y D、Z 4、细菌培养基常在121o C压力锅中灭菌，如果只是在100oC的温度下降细菌培养基灭菌，以下哪一种生物仍会存活（ ） A、大肠杆菌 B、一种青霉 C、枯草芽孢杆菌 D、沙门氏菌 5、下列操作与灭菌无关的是（ ） A、接种前用火焰灼烧接种环 B、接种前用酒精擦拭双手 C、培养基在50oC时搁置斜面 D、接种在酒精灯的火焰旁完成 6、培养基分装完毕以后，在管口上加一棉塞，下图中哪种加棉塞的操作是正确的（ ） 7、在用高压蒸汽锅灭菌时，其灭菌的正常压力为（ ） A、49KPa B、98KPa C、9800KPa D、9.8KPa 8、高温灭菌的原理是（ ） A、每种微生物生长的最适温度是一定的 B、微生物对于高温环境部适应 C、高温破坏了细胞内的蛋白质、核酸，影响其生命活动 D、高温降低了环境中氧的浓度 9、在培养基的配制过程中，下列哪项操作是不正确的（ ） A、趁热降培养基分装到洁净的试管中，培养基高度为试管长度的1/5 B、在溶化过程的最后要补加蒸馏水至100mL C、在调pH值时要随时用pH试纸测pH D、试管加塞后，每10支用绳扎捆，在试管外挂上标签，注明培养基名称、配制日期和制作者