不同倍性泥鳅杂交的效果研究.docVIP

第三章 不同倍性泥鳅杂交的效果研究 泥鳅（Misgurnus anguillicaudatus）试验用鱼，2龄泥鳅，体长15~20cm，健康无疾病，无肉眼可见畸形。二倍体(2n)通过倍性鉴定从北京本地泥鳅中筛选，三倍体(3n)3尾、四倍体(4n)尾，均由大连海洋大学水产动物遗传育种实验室提供。 不同倍性泥鳅杂交方法 分别挑选不同倍性(2n、4n)和性别(、)的泥鳅进行杂交。设置4组，分为3个试验组(2n×4n，4n×2n，4n×4n)，1个对照组(2n×2n)，每组3个平行。其中每个杂交组合使用泥鳅3尾(:♂=1:2)，共用泥鳅36尾，(2n、4n)各6尾，(2n、4n)各12尾。杂交试验采用人工催产，干法授精。将卵收集于盛有曝气水的方形孵化槽中(14cm×10cm×1.3cm)进行孵化，每个孵化槽布卵200粒左右，出苗后移至较大的水槽中(20cm×15cm×15cm)进行后续培养试验。 受精率、孵化率、成活率的测定 每个杂交组合随机挑选200粒泥鳅卵统计受精率、孵化率和成活率，每组设置3个平行。卵发育至原肠中后期时统计受精率；发育至出膜前期时统计孵化率(相对孵化率)；孵化后第7天统计早期成活率。相关计算公式如下： 　　 (1－3) 　(1－4) (1－5) 日常管理 苗孵出前每隔12小时换水1次，出苗至开口前1天换水1次，孵化后3天左右卵黄囊卵黄吸收完毕开始投饵，开口饵料投喂轮虫，投饵每天早、中、晚各投喂1次，日投饵量不超过为鱼体重的 3%；按时吸污换水，每日2次，日换水不超过总水量的1/2。培育过程中24h微充气，室内自然光照，水温25±1，并注意及时剔除死卵(苗)，保持水质清新，以确保健康卵(苗)正常发育。 数据处理 试验数据用平均值±标准差(±SD)表示，使用SPSS17.0分析软件进行方差分析和多重比较。 杂交后代的受精率、相对孵化率和早期成活率 受精率、孵化率和成活率如表2-3所示。试验组(2n×4n、4n×2n、4n×4n)的受精率分别为(82.5%)、(83.0%)、(78.8%)，相对孵化率(89.1%)、(81.8%)、(82.4%)，7日成活率(82.8%)、(75.2%)、(73.4%)，与对照组(2n×2n)的受精率(84.9%)、相对孵化率(89.3%)、成活率(85.6%)相比均无显著差异(P0.05)。 表-1 杂交后代的的受精率、孵化率、相对孵化率和7日成活率 Tab-1 Fertilization rate, normal hatching rate and survival rate at 7 days after fertilization using diploid and tetraploid loaches. 杂交组合 Crosses 受精率(%) Fertilization rate 相对孵化率(%) Normal hatching rate 成活率(%) Survival rate 2n×2n 84.8±0.07a 89.3±0.06a 85.6±0.05a 2n×4n 82.5±0.06a 89.1±0.08a 82.8±0.04a 4n×2n 83.0±0.04a 81.8±0.04a 75.2±0.10a 4n×4n 78.8±0.04a 82.4±0.03a 73.4±0.08a 注：同一列标注不同上标表示差异显著(P0.05)。 图3-1 不同杂交组合出膜后第7天泥鳅苗 A 2n x 2n B 2n x 4n C 4n x 2n D 4n x 4n Fig.3-1 Fries of loach after hatching senven days later in different hybrid cross of loach A 2n x 2n B 2n x 4n C 4n x 2n D 4n x 4n 3 讨论 相关文献报道了在日本市场发现的起源不明的自然四倍体泥鳅具有4 套染色体，雌、雄均可育，能够产生2n 的卵和精子[8, 12]。因此，用2n 配子(卵、精子)进行人工受精及染色体操作产生了各种多倍体的后代[13, 33, 34]。本研究表明，通过人工催产获得不同倍性泥鳅的杂交后代，受精率统计结果显示，3个试验组(2n×4n、4n×2n、4n×4n)与对照组(2n×2n)相比均无显著差异。由此推测，四倍体泥鳅的卵具有与二倍体泥鳅卵相似的受精力及随后的细胞分裂能力，四倍体精子和二倍体精子的受精能力无显著差别。在孵化率和早期成活率方面，试验组(2n×4n、4n×2n、4n×4n)与对照组(2n×2n)相比均无显著差异，且有较高的孵