肾移植患者尿液Smad2,4,7蛋白检测分析早期发现慢性移植肾肾病.docVIP

肾移植患者尿液Smad2,4,7蛋白检测分析早期发现慢性移植肾肾病7-10年后会逐渐进展至肾功能衰竭【1】，而移植后移植肾长期存活却未取得相应的提高，因此，怎样使移植肾的生存时间更为延长就成为了摆在世界各国医生面前的一项难题，探索其发生原因，发现慢性移植性肾肾病是肾移植物肾功能进一步减退及最终丧失的主要原因【2】。CAN主要发生在肾移植术3个月后，在临床上主要表现为进行性肾功能减退或丧失以及有或没有不同程度的蛋白尿、血压升高等，与此同时该移植患者应排除是否发生急性排斥反应以及有明确导致慢性肾功能不全病因(如肾小球肾炎复发、梗阻或反流、肾动脉狭窄、急性免疫抑制药药物中毒)的各种疾病【3-4】。过去常常习惯于把这种移植肾肾功能减退称为慢性排斥反应，鉴于其发病原因既有免疫因素也有非免疫因素，故现在更倾向于概括为“慢性移植性肾肾病”这一更加宽泛的名称。CAN主要的组织病理学特征为系膜基质增多、肾小球硬化，肾小管萎缩、间质纤维化和间质炎症（如间质单核巨噬细胞、淋巴细胞的浸润CAN具体发病机制目前仍未阐明，但转化生长因子β（TGF-β）（extracellular matrix, ECM）CAN的发病机制中发挥着重要的作用【7-8】。在TGF-β/Smad信号传导通路中，其中Smad蛋白是该通路下游信号中的一种非常重要的信号转导分子，参与了该通路的胞内信号转导【9】。目前临床上诊断CAN最有效的方法是对肾移植物进行穿刺活检，而要及时早期诊断CAN，最行之有效的检查方法就是对肾移植物进行程序性穿刺活检【10-11】，但是因为其是一种有创性检查，不利于动态监测的实施，所需费用高、检查周期长、重复操作性差等缺点，并且操作后可能会出现出血、尿瘘、感染、疼痛等一系列并发症，这样一来就会给患者造成许多恐惧和痛苦，使其临床应用的普遍性受到限制。因此发现一种早期、有效、安全、无损伤的CAN监测手段是临床急切需要解决的重要问题之一。 蛋白质组学是继基因组学后又一项重要的发现，其提出到现在虽然仅仅短短10余年，但对其的研究却获得了迅猛的发展。目前蛋白质组学越来越受到重视，地位也在进一步加强，其正在成为本世纪的一项前沿科学研究。尿液中的蛋白质组成分主要由肾小球滤过的蛋白质分子和由肾小管及集合管自身分泌的蛋白质分子所组成，通过检测尿液中的这些蛋白质分子可以间接反映泌尿系统及全身的功能状态，从而早期及时发现疾病，因此对蛋白质组学进行进一步的研究将会是非常有意义的。目前国内外学者一直致力于寻找一种无创伤又高效的CAN监测指标，利用这种“生物标志物”（biomarker）Bence-Jones）的物质，发现它可以作为多发性骨髓瘤的一种诊断标志物[12]。近年来，随着对尿液蛋白质组学研究的不断深入探索，已经有越来越多的研究者开始尝试着通过检测尿液中出现的某种蛋白质分子来诊断疾病和预测疾病的预后以及探索疾病的具体的发病机制，如现在已经开始运用于肾移植后糖尿病肾病、糖尿病肾病、移植肾急性排异、心脏手术后的急性肾损伤、肾病综合征等肾脏疾病，但对于肾移植后发生的移植肾肾病的研究却相当少[13, 14]。这种想法的发现，使得早期动态监测CAN发生发展的无创伤性检查手段成为一种可能，而本研究通过监测CAN与非CAN患者尿液中smad2、smad4、smad7mRNA的表达值，然后将试验组和对照组所得的数据进行统计学分析。同时发现肾移植术后未出现慢性移植肾肾病病理表现的患者与CAN患者之间尿液中蛋白和mRNA表达的差异，这样可为临床医生在临床上早期评估肾功能情况并及时诊断CAN提供一种新的指导思想。 研究对象与方法 研究对象 收集1999年8月至2010年3月期间已经在宁波市鄞州二院接受肾脏移植患者80例，根据在2012年对上述肾移植患者行肾穿刺活检，然后根据病理报告结合临床表现诊断为慢性移植肾肾病(CAN组)的患者30例，其中男23例，女7例，年龄25-61岁，平均(43.76±11.549)岁，正常对照组为经肾穿刺活检确认无慢性移植性肾肾病病理表现的30例肾移植患者，男27例，女3例，年龄30～66岁，平均(48.18±13.280)岁。移植肾患者CAN组入选标准(1)全部经移植肾穿刺活检，根据“Banff2009”分类标准，移植肾在组织学上无急性排斥反应、肾血管狭窄、急性CsA/ FK506中毒、各种肾小球肾炎复发等特征性病理表现，其在组织学上却是以间质纤维化、系膜基质增多、肾小球硬化，肾小管萎缩等为特点的各种非特异性病理改变(2) 每个测试者没有急慢性尿路感染性疾病，男性排除前列腺炎症，女性排除盆腔炎症等生殖系统感染样品收集前也未接受除常规免疫抑制剂外任何药物治疗。CAN组入选标准(1) 全部经移植肾穿刺活检，移植肾在组织学上没有以间质纤维化、系膜基质增多、肾小球硬化，肾小管