核酸的结构与功能概述.ppt

第二章核酸的结构与功能 Structure and Function of Nucleic Acid 1868年 Fridrich Miescher 从脓细胞中提取核素。 1944年 Avery等人证实DNA是遗传物质。 1953年 Watson和Crick发现DNA的双螺旋结构。 1968年 Nirenberg发现遗传密码。 1975年 Temin和Baltimore发现逆转录酶。 1981年 Gilbert和Sanger建立DNA测序方法。 1985年 Mullis发明PCR技术。 1990年 美国启动人类基因组计划(HGP)。 1994年 中国人类基因组计划启动。 2001年 美英等国完成人类基因组计划。 碱基的互变异构体 定义 核酸中核苷酸的排列顺序。由于核苷酸间的差异主要是碱基不同，所以也称为碱基序列。 核酸分子大小表示法： 碱基数目表示 base、 kilobase、用于单链DNA或RNA 碱基对数目 base pair(bp), kilobase pair(kbp)用于双链DNA或RNA 小的核酸片断（小于50bp）称寡核苷酸(oligonucleotide)。 自然界中的DNA和RNA的长度可以高达几十万个碱基。 亲水性的骨架位于双链的外侧。 疏水性的碱基位于双链的内侧。 亲水性的骨架位于双链的外侧。 疏水性的碱基位于双链的内侧。 亲水性的骨架位于双链的外侧。 疏水性的碱基位于双链的内侧。 DNA的功能 5?端形成 帽子结构(m7GpppGp —) (一) tRNA的特点 1.含 10~20% 稀有碱基，如 DHU、 T?C。 2. 3′末端为 — CCA-OH； 5′末端大多数为G。 反义RNA是指与mRNA互补的RNA分子, 也包括与其它RNA互补的RNA分子。由于核糖体不能翻译双链的RNA，所以反义RNA与mRNA特异性的互补结合, 即抑制了该mRNA的翻译。通过反义RNA控制mRNA的翻译是原核生物基因表达调控的一种方式，最早是在E.coli 的产肠杆菌素的Col E1质粒中发现的,许多实验证明在真核生物中也存在反义RNA。近几年来通过人工合成反义RNA的基因, 并将其导入细胞内转录成反义RNA, 即能抑制某特定基因的表达,阻断该基因的功能, 有助于了解该基因对细胞生长和分化的作用。同时也暗示了该方法对肿瘤实施基因治疗的可能性。 核酸是含磷酸和碱基的两性电解质。 核酸为多元酸，具有较强的酸性。 核酸的高分子性质 粘度：DNARNA dsDNA ssDNA RNA分子比DNA短，在溶液中的粘度低于DNA。 沉降行为:不同构象的核酸分子的沉降的速率有很大差异，这是超速离心法提取和纯化核酸的理论基础。 第五节 核酸酶 Nuclease 小结 核酸的化学组成 核苷酸---基本单位 碱基(嘌呤、嘧啶)—戊糖—磷酸 一级结构:碱基顺序 连接键 两端 方向 DNA的二级结构---双螺旋结构 DNA高级结构—超螺旋结构 DNA功能 RNA的结构与功能 单链、种类多-----mRNA 、tRNA 、 rRNA结构的特点及功能 snmRNA---概念、功能、RNA组学 核酸的理化性质 紫外吸收 DNA变性:定义、变性的实质、增色效应、解链曲线、Tm 、Tm与碱基组成的关系 DNA复性、杂交的概念 核酸酶 碱基的紫外吸收光谱 DNA或RNA的定量 A260 = 1.0 相当于 50μg/ml 双链DNA(dsDNA) 40μg/ml 单链DNA (ssDNA or RNA) 20μg/ml 寡核苷酸 确定样品中核酸的纯度 纯 DNA: A260/A280 = 1.8 纯 RNA: A260/A280 = 2.0 紫外吸收的应用 二、DNA变性是双链解离为单链的过程 (一)变性 (denaturation) 1.定义 在某些理化因素作用下，DNA双链解开成两条单链的过程。本质是双链间氢键的断裂。 3.变性后其他理化性质变化 ① OD260增高 ② 粘度下降 ③ 生物活性丧失 (1)理化性质变化 2.因素 强酸，强碱，高温，高压，变性试剂如尿素以及某些有机溶剂如乙醇等。 协同性的DNA解链 高温或极端的pH DNA的变性 部分变性DNA的电镜图像 增色效应(hyperchromic effect)：DNA变性时其溶液OD260增高的现象。 DNA解链时的紫外吸收变化 DNA的解链曲线 连续加热DNA的过程中以温度相对于A260值作图，所得的曲线称为解链曲线。 解链过程中，紫外吸光