红细胞检验的基本方法概述.ppt

三、抗碱血红蛋白检测将待检的溶血液与一定量的NaOH溶液混合，作用1分钟后加入半饱和硫酸铵中止碱变性反应。胎儿血红蛋白（HbF）抗碱变性作用强，没有变性存在于上清液中，HbA变性沉淀，取上清液于540nm处测定吸光度，检测出HbF的浓度。此试验也称为碱变性试验，成人＜2％；新生儿＜40％ ①HbF绝对增多：珠蛋白生成障碍性贫血，重型者达30％～90％，中间型常为5％～30％，轻型小于5％。遗传性胎儿血红蛋白持续综合征患者，可高达100％。 ②HbF相对增多可见于骨髓纤维化、白血病、浆细胞瘤等恶性疾病及再生障碍性贫血、PNH、卟啉病等。 ③HbF生理性增多见于孕妇和新生儿。 四、HbF酸洗脱法检测HbF具有抗碱和抗酸作用，其抗酸能力比HbA强。将血涂片于酸性缓冲液中孵育，含HbF的红细胞不被酸洗脱，可被伊红染成红色，而含HbA的红细胞均被酸洗脱，不能被伊红着色。正常血片中含HbF的着色红细胞：成人＜0.01（1％）新生儿0.55～0.85（55％～85％）以后渐渐下降，2岁后幼儿＜0.02（2％）孕妇可有轻度增加。着色细胞增加：珠蛋白合成障碍性贫血重型患者大多数红细胞染成红色；轻型患者可见少数染成红色的细胞；遗传性胎儿血红蛋白持续综合征红细胞均为红色。 五、异丙醇沉淀试验不稳定血红蛋白较正常血红蛋白更容易裂解，在异丙醇这种能降低血红蛋白分子内部氢键的非极性溶剂中，不稳定血红蛋白更快地沉淀。通过观察血红蛋白液在异丙醇中的沉淀现象对不稳定血红蛋白进行筛检。正常人血红蛋白液为阴性（30分钟内不沉淀） 不稳定血红蛋白存在时，常于5分钟时出现沉淀，20分钟开始出现绒毛状沉淀。血液中含有较多HbF、HbH、HbE时也可出现阳性结果。 六、热变性试验热变性试验（heat instability test）是根据不稳定血红蛋白比正常血红蛋白更容易遇热变性，观察血红蛋白液在50℃时是否出现沉淀，对不稳定血红蛋白进行筛检。 正常人热沉淀的血红蛋白＜1％ 血红蛋白沉淀率增加，说明不稳定血红蛋白存在。 七、聚丙烯酰胺凝胶电泳检测尿素或对氯汞苯甲酸能破坏血红蛋白的空间 结构，血红蛋白的珠蛋白可被裂解成肽链亚 单位，通过聚丙烯酰胺凝胶电泳可分离出各 肽链区带。正常血红蛋白HbA裂解后出现β、HbA、HbA2和α四条带。 本试验若有异常血红蛋白肽链的区带出现， 表示有异常血红蛋白存在。对珠蛋白生成障 碍性贫血的诊断和鉴别有参考价值。 2、参考值： 正常人：阴性 一、酸化血清溶血试验酸化血清溶血试验，也称Ham’s test ，即红细 胞在酸性（pH6.4～6.5）的正常血清中孵育， 补体被激活，PNH红细胞破坏而产生溶血。而 正常红细胞不被溶解，无溶血现象。本试验阳性主要见于PNH，某些自身免疫性血性贫血发作严重时可呈阳性。 第七节 PNH的检验 1、原理： 二、蔗糖溶血试验 蔗糖溶血试验（sucrose hemolysis test）是根据PNH患者的红细胞,在低离子强度的蔗糖溶液中对补体敏感性增强，经孵育，补体与红细胞膜结合加强，蔗糖溶液进入红细胞内，导致渗透性溶血而设计的。 定性试验：正常为阴性 定量试验：正常溶血率＜5％ 阳性或溶血率增加：PNH患者（可作为PNH的筛选试验）；自身免疫性溶血性贫血。 假阳性：白血病、骨髓硬化。 三、蛇素毒因子溶血试验蛇毒因子溶血试验（venom hemolysis test）采 用从眼镜蛇毒中提取的一种蛇毒因子（C3b）， 通过旁路途径激活补体，PNH患者的红细胞补体 系统激活后，促使PNH补体敏感细胞破坏、溶血。正常人溶血率＜5％ 溶血率增加，PNH的可能性大，可反映PNH Ⅲ 型红细胞的溶血情况。正常红细胞、PNH I型 和PNH Ⅱ型等的红细胞均不发生溶血。 第八节 免疫性溶血性贫血的检验 1、原理： 抗人球蛋白试验 抗人球蛋白试验 直接Coombs试验： 间接Coombs试验: 应用抗人球蛋白试剂（抗IgG/或抗C3d）与红细胞表面的IgG分子结合，如红细胞表面存在自身抗体，出现凝集反应。 应用Rh(D)阳性O型正常人红细胞与受检血清混合孵育，如血清中存在不完全抗体，红细胞致敏，再加入抗人球蛋白血清，可出现凝集。 + + + Coombs试验检测原理图 完全抗体 凝集 凝集 致敏红细胞无凝集 不完全抗体 2、参考值： 正常人DAGT/IAGT试验均为阴性。 3、临床评价： 自身免疫性溶血性贫血 冷凝集素综合症 新生儿同种免疫性溶血 阵发性冷性血红蛋白尿 药物性免疫性溶血等 阳性： 冷凝集素试验 冷凝集素综合征的患者血清中存在冷凝集素，为IgM类完全抗体在低温时可使自身红细胞、O型红细胞 或与受检者血型相同的红细胞发生凝集。 凝集反应的高峰在0～4℃，当温度回升到37℃时凝集消失