天然产物化学02-2__分离和鉴定摘要.ppt

Zhejiang University College of Animal Sciences 第二节 分离精制和鉴定的 方法与技术 化学成分分离精制常用方法原理 利用温度不同引起溶解度的改变 结晶、重结晶 改变混合溶剂极性 加另一种极性相差较大的溶剂——混合溶剂极性改变——部分物质沉淀析出 A． 水/醇法：除去水提液中的水溶性杂质 B． 醇/水法：除去醇提液中的脂溶性杂质 C． 醇/醚法（醇/丙酮法）：纯化皂苷 调节pH 酸、碱、两性成分 调节PH——改变的分子存在状态——改变溶解度 A．酸/碱法（酸提取碱沉淀法）： 生物碱的提取、纯化 B．碱/酸法（碱提取酸沉淀法）： 黄酮、蒽醌等酚性成分的提取、纯化 C. 调节PH至等电点，沉淀蛋白 沉淀法 在中草药提取液中加入某些试剂使产生沉淀，以获得有效成分或除去杂质的方法。 （1）铅盐沉淀法 （2）试剂沉淀法 ⑴ 铅盐沉淀法 铅盐沉淀法为分离某些中草药成分的经典方法之一。 醋酸铅及碱式醋酸铅，能与多种化学成分生成难溶的铅盐或络盐沉淀，故可利用这种性质使有效成分与杂质分离。 中性醋酸铅可与酸性物质或某些酚性物质结合成不溶性铅盐。因此，常用以沉淀有机酸、氨基酸、蛋白质、粘液质、鞣质、树脂、酸性皂甙、部分黄酮等。 与碱式醋酸铅产生不溶性铅盐或络合物的范围更广。 ⑵ 试剂沉淀法 在生物碱盐的溶液中，加入某些生物碱沉淀试剂，则生物碱生成不溶性复盐而析出。水溶性生物碱难以用萃取法提取分出，常加入雷氏铵盐使生成生物碱雷氏盐沉淀析出 用明胶、蛋白溶液沉淀鞣质；胆甾醇也常用以沉淀洋地黄皂甙等。 2、根据物质在两相溶剂中的分配比不同进行分离 分配系数（K） 两种相互不能任意混溶的溶剂（如氯仿与水）如置分液漏斗中充分振摇，放置后即可分成两相。此时如果其中含有溶质，则溶质在两相溶剂中的分配比（K）在一定温度及压力下为一常数，可以下式表示： K=CU/CL K：分配系数；CU：溶质在上相溶剂中的浓度；CL：溶质在下相溶剂中的浓度。 ①液-液萃取法 ②逆流连续萃取法 ③逆流分配法（CCD） ④液滴逆流色谱法（DCCC） ⑤高速逆流色谱法（HSCCC） ⑥气液分配色谱（GC或GLC） ⑦液-液分配色谱（LC或LLC） 液-液萃取法 利用混合物中各成分在两种互不相溶的溶剂中分配系数的不同而达到分离的方法。 萃取时如果各成分的分配系数相差越大，分离效率越高。 系统溶剂萃取法： 常用来粗分，是将总提物分散于水中，依次用石油醚（或环己烷）、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇萃取，分别减压回收溶剂得到相应极性的成分。 水提取液中的有效成分是亲脂性的物质，一般多用亲脂性有机溶剂，如苯、氯仿或乙醚进行两相萃取；有效成分是偏于亲水性的物质，需用弱亲脂性的溶剂，例如乙酸乙酯、正丁醇等。 提取黄酮类成分多用乙酸乙脂和水的两相萃取。 提取亲水性强的皂甙则多选用正丁醇、异戊醇和水作两相萃取。 逆流连续萃取法 利用两相溶剂比重不同可自然分层和分散液滴穿过连续相溶剂时发生传质的原理，用一根或数根萃取管制成逆流连续萃取装置。管内的瓷环，增加液滴上升的路程和在连续相中停留的时间，更重要的是上升的液滴因撞击填充物而被分散，扩大了两相溶剂萃取的接触面积，使更萃取完全。克服了分液漏斗多次萃取和易乳化的麻烦。 一、简述 气液分配色谱 以惰性气体为流动相、以固定液作为固定相的色谱法称为气相色谱法（GC）。气液色谱的固定相是在化学惰性的固体颗粒表面上，涂一层高沸点有机化合物的液膜或直接将高沸点有机化合物均匀地涂敷在毛细管的内壁，并形成一层均匀的液膜。 在气液色谱中，当载气携带被测样品进入色谱柱，气相中的被测组分就溶解到固定液中。载气连续流经色谱柱，溶解在固定液中的组分会从固定液中挥发到气相中，随着载气的流动，挥发到气相中的组分又会重新溶解到前面的固定液中。这样反复多次溶解、挥发、再溶解、再挥发。由于各组分在固定液中的溶解度不同，溶解度大的组分较难挥发停留在色谱柱中的时间就长些；而溶解度小的组分易挥发，停留在色谱柱中的时间就短些，经过一定时间后，各组分就彼此分离并依次流出色谱柱。 气相色谱法的优点 分离效率高：是指它对性质极为相似的组分有很强的分离能力。 灵敏度高：使用高灵敏度的检测器可检测出痕量组分。 分析速度快：相对化学分析而言，完成多组分分析仅需几分钟至几十分钟。 分析需要样品量很少。 高效液相色谱（HPLC） HPLC是在经典液相色谱基础上引入气相色谱的塔板理论，并采用了高压输液泵、高效固定相和高灵敏度的检测器，具有分析速度快、分离效率高和操作自动化特点的一种色谱技术。 HPLC特别适合高沸点