对虾白斑杆状病毒(White spot bacilliform virus,WSBV)基因结构与功能及其分子检测分析研究.doc

中国科学技术大学 博士学位论文 对虾白斑杆状病毒(White spot bacilliform virus,WSBV)基因 结构与功能及其分子检测 姓名：章晓波 申请学位级别：博士 专业：分子生物学 指导教师：徐洵 1999.11.1  ?? ??? 攮要 亡的主要病原，它是一种新的病毒。迄今为止有关??：基因方面的研究尚未 见到报道，也未发现该病毒的有效防治方法，建立快速、简便、特异的检测方 法成为对虾病害防治的关键，进行其基因结构与功能的研究，可以进一步了解 在??；基因结构与功能研究的同时，建立特异简便的检测方法一一酶联免疫 吸附测定???∮ü釶?技术，以期为对虾白斑杆状病毒的防治提供科学依 据。 名为比校?．了?对?虾?白和斑可能杆编状码病结毒构和蛋白昆虫的杆新状基病因毒???姐?结猵合蛋白???基騥因一及一 其编码产物 编码多肽的一级结构、二级结构及亲疏水性都很担丝。??痯??基因与绿色荧光 白。提取融合表达产物，与??拢????呵ㄒ坡时涠?治霰砻鱬??基因的编 码产物可与??岷希?馐瞧?裎V筗??谝桓霰环⑾值幕?颉！ⅰ⒁籧哪 表达，表达产物形成包涵体。研究发现，：?．??．基因的前导序列中存在一个小 顺反子，这个小顺反子较多使用对虾基因和白斑杆状病毒基因的稀有密码子。 试验表明，在??基因的前导序列中存在或不存在小顺反子时，该基因都可在 大肠杆菌诱导表达，但两者的表达量不同，小顺反子可能对??基因具有调控 作用。在其它病毒基因中，发现存在小顺反子的基因都比较重要，??；基因可 ??????膊阄龃炕?竦肐?，再利用??缸酶切从 ??聘鱂?片段。结果表明，??捎糜诤?韵喊装吒俗床《镜亩韵貉?返腅?? 检测，检测具有特异性，可检测的最小病毒量为每?组织病毒含量??奖矗簓苯、 也可以打开，符合??对分子信标探针的要求。结果表明，在?聚同时加入分 子信标探针不影响??┰觯?肿有疟晏秸胫荒苡肽康腄?杂交，具有较高的 度郡随之增强。   ???? ???? ?? ????? ???? ???? ? ? ?? ??? ?????? ? ? ? ? ??? ??? ??? ? ? ???????? ????? ?? ?? ? ????? ?醕?? ? ?? ? ?．? ?? ? ????????? ?? ????? ? ??????? ?? ??????? ? ??? ???? ??? ? ? ?? ??? ????? ?? ? ? ?? ? ? ? ?????? ?? ? ???? ?? ? ?? ? ????? ?? ? ??? ???? ?? ???????? ? ????? ???????? ???? ?? ??? ?? ????瓸?? ? ???．?? ? ? ?甤??產 ? ????甌? ? ?? ?? ? ? ????．? ???? ?? ?? ? ?? ? ?? ?? ? ?? ?? ????? ?? ?? ?? ???? ?? ??? ???????? ?? ? ?甌? ? ???? ? ? ?? ???? ???? ???? ??? ?? ?? ?? ?????? ? ?? ???? ?? ?? ???? ?????甅?? ???? ?? ?????? ?? ??? ?????甅?? ?? ?? ?? ?? ? ? ? ?? ?? ???? ?? ???? ?? ?????? ? ?? ????．?鴈 ? ???? ?? ? ?猄????琹? ?? ? ?? ???? ???? ??? ?? ?? ??? ? ? ?? ?? ? ? ???? ??? ???????? ?? ? ??? ? ?? ? ? ??? ???? ??????? ?? ???? ? ?? ??．? ??? ????????? ? ? ? ????． ? ? ?? ? ??? ?? ?  ?? ? ?? ?????甌? ? ? ?? ???? ?? ? ??? ? ??? ? ?? ??甌? ? ? ??????? ? ??? ? ?? ??甌? ??? ? ????? ????? ? ??? ???? ?? ??? ??????． ??? ??????籊??籇? ?? ????? ??? ????籘? ????籊????? ????? ? ?????? ??? ????籄????籉?????；??? ???  致 谢 我要特别感谢我的妻子刘雪蕾及岳父母一家，在我攻读博士学位期间，他 们承担了养育女儿的全部责任，为我的生活提供了保障和温暖，使我能安心从 事论文研究。  第一章文献综述 ??对虾病毒的类型 的桃红小对虾???? 形态特性以及细胞病变效应与杆状病毒科的病毒相似，因此称之为