CS应用于工基因传递的研究现状及进展.docx

CS应用于基因传递的研究现状及进展研究背景：RNA干扰（RNAi）:1998年，Fire及其工作团队做线虫Caenorhabditiselegans, discovered实验时，发现短双链RNA(dsRNA)能干扰基因表达。RNAi的发现为疾病临床治疗尤其是基因类疾病的治疗提供了一种新方法, RNAi是siRNA作为介导子引起的特异性地降解相同序列的mRNA，从而阻断相应基因表达的转录后基因沉默机制 [1]。[1] Castanotto D, Rossi JJ. The promises and pitfalls of RNA–interference–based therapeutics. Nature, 2009, 457: 426–433.（外源dsRNA经dicer剪切或是外源化学合成或是质粒DNA转录形成的siRNA）siRNA是长度为21到23个核苷酸的双链RNA ，是RNAi机制中的重要效应物。通过向生物体内导入特异外源性小RNA可以实现基因治疗的效果，方法有物理技术基因枪、电穿孔术、高压注射，载体技术病毒、脂质体等。但是裸siRNA由于具有核酸分子类特性，在高浓度血清环境中极易被核酸酶降解而不稳定，且不易被组织吸收，具有稳定性差、半衰期短、细胞内转染效率低和靶向性差等缺点[2]，【2】Yan Wang1,2, Zhiguo Li1 and Yee Han3, ect. Nanoparticle-Based Delivery System for Application of siRNA In Vivo. Current Drug Metabolism, 2010, 11, 182-196。载体的研究成为解决问题的关键。基因载体有两类，病毒类和非病毒类。传统的基因传递是通过病毒载体来实现的，病毒载体会引起炎症反应、不良的免疫反应并具有致癌作用[3]。[3] Simon RH, Engelhardt JF, Yang Y, Zepeda M, Weber–Pendelton S, Grossman M and Wilson JM. Adenovirus–mediated gene transfer of the CFTR gene to lung of non–human primates: toxicity study. Human Gene Therapy, 1993, 4: 771–780.非病毒类载体有脂质体、阳离子聚合物类如枝状分子、研究较多的PEI、CS等，非病毒类载体还包括无机类包括磁纳米粒、量子点（Qdot）纳米粒、碳纳米管、金纳米粒或是纳米杆。由于低毒性，低免疫原性[9]，优良的生物降解性和生物相容性等有利特质，壳聚糖（CS）被尝试与siRNA自组装成聚电解质复合物用于基因转运[10] [10] Borchard G. Chitosans for gene delivery. Advanced Drug Delivery Reviews, 2001, 52: 145–150。CS是甲壳类动物(如虾、蟹)、昆虫和其它无脊椎动物外壳中的甲壳质(chitin) 经脱乙酰化制得的一种天然高分子多糖体，由氨基葡萄糖经β-1,4-糖苷键连接而成，是自然界中唯一的碱性多糖【3】【3】Shirui Mao, Wei Sun , Thomas Kissel . Chitosan-based formulations for delivery of DNA and siRNA. Advanced Drug Delivery Reviews 62 (2010) 12–27。与siRNA可以通过基于静电相互作用、包封或者吸附的方法制备成复合物，如：离子交叉连接[5, 11]，离子凝胶化[5, 12]，乳化[13]，凝聚[14, 15]，共价交联[16]，去溶剂化[17]等。[5] Katas H, Alpar HO. Development and characterisation of chitosannanoparticles for siRNA delivery. Journal of Controlled Release, 2006, 115: 216–225. [11] Liu XD, Howard KA, Dong M, Andersen M?, Rahbek UL, Johnsen MG, Hansen OC, Besenbacher F, Kjems J.The influence of polymeric properties on chitosan/siRNAnanoparticle formulation and gene silencing.Biomaterials, 2007, 28: 128