乙肝表面抗原测定__培训课件.pptVIP

电化学发光免疫测定 是电化学发光和免疫测定相结合的产物。 发光免疫技术 新 技 术 实时荧光定量PCR（FQ-PCR） FQ-PCR是一种实时定量检测技术,融汇了PCR的灵敏性、DNA杂交的特异性和光谱技术的精确定量等优点。基本原理是利用TaqDNA聚合酶的5-3外切核酸酶活性,在扩增的同时降解杂交于扩增区域内的探针,使连接于杂交探针的荧光淬灭基团和荧光发射基团分离而产生荧光,因此荧光强度的变化能反映扩增产物量的变化。 基因芯片 基因芯片是近几年生命科学研究领域的一项新检测技术，它是指固定基质上集成各种可以作为受体的生物信息，利用受体与连接物间的反应来进行生物学的检测。主要包括蛋白芯片和基因芯片。蛋白芯片是将位置和结构已知的大量蛋白、多肽分子、酶、抗原、抗体按预先设计好的方式固定于滴定板、滤膜和载玻片等各种载体上组成密集的分子排列，当荧光、免疫金等标记的靶分子与芯片上的探针分子结合后，通过一些定量检测方法对标记信号的强度进行检测，从而判断样品中的靶分子的数量，达到一次实验同时检测多种生物样品的目的。 微粒子酶免疫分析(MEIA) ?? MEIA检测HBsAg是目前世界上检测乙型肝炎病毒标志物的金标准，采用顺磁性微粒作为固相载体，用稳定的4-甲基磷酸伞型酮(MUP)测出荧光发光的强度来检测被测物的浓度，对HBsAg检测的灵敏度达0.17~0.2?ng/ml。它不但灵敏度高且抗干扰能力强，重复性好，并可单份检测，可检出人群中低浓度和自然感染获得的乙型肝炎病毒核心抗体. 因此认为MEI法对血清HBV标志物的检出阳性率高于ELISA法,MEIA比ELISA自动化程度高，对病情可做动态监测。 乙肝表面抗原测定 组员:王安娜、李婷玉、罗梦娇、翁博文 综述 乙型肝炎病毒： 机体感染HBV后血清中首先出现的标志物，可作为乙肝的早期诊断和普查 HBsAg无传染源性而有免疫原性，可刺激机体产生抗-HBs 通过血液检测是唯一检测是否感染乙肝病毒的唯一途径 乙肝病毒是通过血液传播，主要通过母婴，血液和性传播。日常生活和工作接触不会传播乙肝病毒。 如果HBsAg、HBeAg和抗HBc三项阳性（即为大三阳），其血液就有高度传染性 凝集反应 2.间接凝集反应：反向间接凝集 基本原理： 将抗体致敏的红细胞与样本中相应抗原作血凝试验，观察红细胞凝集现象，用以判断样本中相应抗原的有无及其效价。 凝集反应 3.协同凝集反应 基本原理： 以金黄色葡萄球菌为载体； 将特特异性抗体先结合至金黄色葡萄球菌表面； 其Fab段游离与菌体表面，遇到相应抗原时与之结合； 即可导致金黄色葡萄球菌凝集成块，称为协同凝集试验。 凝集反应 沉淀反应 沉淀反应 可溶性抗原（如细菌浸出液、细胞裂解上清液及血清蛋白等）与相应抗体特异性结合，在电解质存在的条件下，出现肉眼可见的沉淀物，称为沉淀反应。 参与沉淀反应的抗原称为：沉淀原 参与沉淀反应的抗体称为：沉淀素 沉淀反应 凝胶沉淀试验 单向琼脂扩散试验： 抗原或抗体这两种成分中只有一种扩散，将已知抗体与琼脂混合，将抗原置于凝胶孔中，抗原则呈辐射状扩散，在孔的周围与抗体结合，在比例合适的地方形成肉眼可见的沉淀环。当抗体的浓度一定时，抗原的浓度与形成沉淀环的直径成正比。 双向琼脂扩散试验： 双向免疫扩散是指抗原和抗体在同一凝胶内部扩散，彼此相遇后形成特 异性的沉淀线。该反应是将抗原和抗体加入同一凝胶中两个相隔一定间距的小孔内，使两者进行相互扩散。当抗原和抗体浓度之比相适宜时，彼此相遇形成一白色弧型沉淀线。 沉淀反应 免疫电泳技术 对流免疫电泳：双向琼脂扩散试验+电泳 火箭免疫电泳：单向琼脂扩散试验+电泳 免疫电泳：双向琼脂扩散试验+区带电泳 沉淀反应 酶标记免疫测定技术 酶联免疫吸附剂测定法 简称酶联免疫法，或者ELISA法。 是固相酶免仪测定中最具代表性的一种 既可检测抗原又可检测抗体 3种必要的试剂： ①固相的抗原或抗体 ②酶标记的抗原或抗体 ③酶作用的底物 双抗体夹心法 酶联免疫吸附剂测定法 基本原理： 将已知抗体包被到固相载体上，使待测标本中的相应抗原与抗体结合，然后再与酶标抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，洗去多余未结和成分，加底物后的显色，根据显色反应的强度确定待检抗原的含量。 2.双位点一步法 基本原理： 在双抗体夹心法基础上使用针对抗原分子上两个不同抗原决定簇的单克隆抗体，分别作为固相抗体和酶标抗体。测定时将待检标本和酶标抗体同时加入进行反应，形成抗体-抗原-酶标抗体复合