【2017年整理】链霉菌诱变育种方法综述.docxVIP

链霉菌诱变育种方法综述 摘要：主要论述了链霉菌的4种诱变方法，即物理诱变、化学诱变、空间技术诱变和复合诱变。同时对这4种方法的原理及具体操作方法进行了简要的阐述。其中物理诱变中的紫外线诱变方法是一种使用时间长、效果好、设备简单、值得推广的诱变剂。化学诱变方法中的EMS、8-Mop、NTG和LiCI也取得了很好的效果。近年来用宇宙系列生物卫星、科学返回卫星、空间站及航天飞机等空间飞行器，进行搭载微生物材料的空间诱变育种是培养新的生物菌种的一种有效方法。将以上诱变方法结合起来使用，可取得更好的诱变效果。 关键词：链霉菌；育种；诱变 放线菌是产生抗生素活性最大的一类微生物，迄今已在工业、医学、农业上都有利用抗生素成功的实例，而链霉菌又是放线菌中抗生素的主要产生菌，具有广泛的物种多样性和代谢多样性，是重要的资源微生物，但在链霉菌中普遍存在遗传不稳定性，而引起抗生素产量下降。因此，各国学者不断研究提高抗生素产量的方法，已期获得更大产量的抗生素，而提高产量的最重要途径是通过育种改变生产菌种。诱变育种是一种简便易行而且快速的选育方法，因而在抗生素的菌种筛选中应用最广泛。 本文就链霉菌诱变育种的几种方法做了简要论述。 1 物理因子诱变方法 1．1 紫外线诱变法 紫外线是一种使用时间长、效果好、设备简单、值得推广的诱变剂，大约有80％的高产抗生素产生菌都曾经用过紫外线这一诱变方法。具体操作方法是将斜面培养物制备成单孢子悬液或原生质体放在磁力搅拌器上，开紫外灯(3ow，距30cm)照射不同的时间后，涂平皿(为防止回复突变，紫外线诱变后的操作应在红灯下进行)进行培养，然后挑取不同形态的单菌落接斜面，进行摇瓶发酵筛选。用此种方法，以土霉素产生菌龟裂链霉菌Lf-2为出发菌株，经过紫外线诱变后，筛选的菌株于出发菌株相比发酵效价提高了17．4％，发酵指数提高了23．9％。黄世文等对淡紫色吸水链霉菌进行紫外线诱变，所获菌株发酵液对水稻纹枯病和恶苗病的抑杀效果比原始菌株明显提高，并且证实用菌悬液涂培养基之后先在28~C培养24 h，再在紫外灯下诱变菌株比涂后直接照射和直接照射菌悬液所获得的诱变菌株的生测效果好，这可能是微生物在培养24} 后，正处在分裂生长的初始阶段，当受到外部“能量”作 用时较易发生变异。孟勇等以带棒链霉菌为出发菌，经紫外线诱变，筛选到1株抗20xl0-S~mL的舒巴坦钠突变株my51，my51菌株产克拉维酸的效价达到834．7x10~g／mL，比出发菌株提高了1．18倍。张雪松以金色链霉菌为出发菌株，经溶菌酶作用制备原生质体，然后以紫外线对原生质体进行诱变处理，获得四环素高产菌株，第20号菌株相对效价为1．284。 1．2 激光辐照诱变法 一定量的激光照射生物体，其能量被生物大分子直接或间接吸收以后，可引起分子激发光解离、分解及生物大分子的自由基反应等，从而导致DNA分子或染色体发生畸变，使生物性状发生突变，这为选育和改良生物品种，提高生物品质提供了有利条件。 1．2．1 He—Ne激光诱变法 He—Ne激光辐照后引起抗生素产量变化的机理尚不太清楚，但是Kapho曾通过实验证明在一定的能量密度范围内，波长在610~850nm的He-Ne激光对细胞内DNA合成有刺激作用，即加速细胞内DNA合成率。陈五岭等报道He—Ne激光对红霉素链霉菌孢子及原生质体的诱变效应。分离到红霉素发酵单位提高27．2％的辐照株。研究了He-Ne激光对金霉素(S．aureofaciens，简称sa)孢子的诱变效应。结果表明，小剂量He-Ne激光对Sa孢子的萌发具有促进作用，大剂量He-Ne激光的照射对sa的孢子具有致死作用；激光诱变sa孢子的正变率最高达到6．6％。采用He—Ne激光对金霉素链霉菌原生质体诱变处理，再生菌株产抗能力与其本菌株相比，四环素产量平均提高9．32％，最高提高20．6％。He-Ne激光和聚乙二醇对红霉素链霉菌和龟裂链霉菌灭活原生质体融合，融合子产抗能力与亲本相比，最多 提高了28．04％，且具有良好的遗传稳定性。 1．2．2 铜蒸气激光诱变育种 吴振倡等首次报道铜蒸气激光辐照林肯链霉菌，获得高产菌株，最高发酵单位比对照株提高15．8％。同样用铜蒸气辐照天蓝淡红链霉菌，获得发酵单位比对照株提高14．7％高产株，最高发酵单位曾达国内最高水平。 1．3 微波诱变育种法 微波是一种高频率的电磁波，利用微波进行诱变具有设备简单、操作简便和安全可靠的特点。其诱变原理是能刺激水、蛋白质、核苷酸、脂肪和碳水化合物等极性分子快速震动。在2 450 MHZ频率作用下，水分子能在1 s内180。来回震动24．5×1O 欠。这种震动能引起摩擦，因此可以使得单孢子悬液内DNA分子间强烈摩擦，孢子内DNA分子氢键和碱基堆积化学力受损，使得DNA结构发生变化，从而发生遗传