生物化学(第一章)2[精选].ppt

第一章　蛋白质化学 胡 第一节 蛋白质（protein）及其生物学功能 生物信息大分子具有如下特征： 生物分子中最重要的是糖、酯、核酸和蛋白质四类物质 分子量一般都很大 由结构小分子结构单元组成. 顺序排列。 结构复杂：线性信息，三维信息 D-氨基酸：抗生素，生物碱 非蛋白质氨基酸 甘氨酸的酸碱滴定曲线 等电点的计算 氨基酸的化学反应 由α-氨基参与的反应 1.与亚硝酸的反应： 氨基酸的化学反应 由α-氨基参与的反应 2.与甲醛反应： 甲醛滴定法 氨基酸的化学反应 由α-氨基参与的反应 4.氨基酰化：氨基保护 氨基酸的化学反应 由α-氨基参与的反应 5.二硝基氟苯：黄色，肽链末端分析 氨基酸的化学反应 由α-氨基参与的反应 6.与异硫氰酸苯酯（PITC）的反应 Edman （苯异硫氰酸酯法）氨基酸顺序分析法实际上也是一种N-端分析法。此法的特点是能够不断重复循环，将肽链N-端氨基酸残基逐一进行标记和解离。 肽链（N端氨基酸）与PITC偶联，生成PTC-肽 环化断裂：最靠近PTC基的肽键断裂，生成PTC-氨基酸和少 一残基的肽链，同时PTC-氨基酸环化生成PTH-氨基酸 分离PTH-氨基酸 层析法鉴定 Edman降解法的改进方法--- DNS-Edman降解法 用DNS(二甲基萘磺酰氯)测定N端氨基酸 原理DNFB法相同 但水解后的DNS-氨基酸不需分离，可直接用电泳或层析法鉴定 由于DNS有强烈荧光，灵敏度比DNFB法高100倍，比Edman法高几到十几倍 可用于微量氨基酸的定量 氨基酸的化学反应 由α-羧基参与的反应 1.成盐反应 氨基酸的化学反应 由α-羧基参与的反应 3.酰化反应 第三节 氨基酸的分离纯化 (一)层析技术的原理 俄国植物学家M.Tswett发现并使用这一技术证明了植物的叶子中不仅有叶绿素还含有其它色素。现在层析法已成为生物化学、分子生物学及其它学科领域有效的分离分析工具之一。 一、层析技术的原理 层析法是利用不同物质理化性质的差异而建立起来的技术。所有的层析系统都由两个相组成：一是固定相，它或者是固体物质或者是固定于固体物质上的成分；另一是流动相，如水和各种溶剂。当待分离的混合物随流动相通过固定相时，由于各组份的理化性质存在差异，与两相发生相互作用（吸附、溶解、结合等）的能力不同，与固定相相互作用力越弱的组份，随流动相移动时受到的阻滞作用小，向前移动的速度快。反之，与固定相相互作用越强的组份，向前移动速度越慢。分部收集流出液，可得到样品中所含的各单一组份，从而达到将各组份分离的目的。 分配层析（萃取的原理） 利用化合物在两种互不相溶（或微溶）的溶剂中溶解度或分配系数的不同，使化合物从一种溶剂内转移到另外一种溶剂中。经过反复多次萃取，将绝大部分的化合物提取出来。 A、B两个溶液系统、 I（A:B=2:1） 1g II（A:B=1:3） 1g 第一次萃取后 A中I有2/3g, II有1/4g I:II=8:3 （2.6倍） B中I有1/3g, II有3/4g I:II=4:9 （2.15倍） 第二次萃取后 A中I有4/9g, II有1/16g I:II=64:9 （7.1倍） B中I有1/9g, II有9/16g I:II=16:81（5.1倍） HPLC:根据出峰的位置及峰高或峰面积，可以定性及定量。层析法与光学、电学或电化学仪器连用，可使操作及数据处理自动化，大大缩短分析时间。由于层析法具有分辨率高、灵敏度高、速度快等特点，因此适用于杂质多、含量少的复杂样品分析，尤其适用于生物样品的分离分析。近年来，已成为生物化学及分子生物学常用的分析方法。在医药卫生、环境化学、高分子材料、石油化工等方面也得到了广泛的应用。 二、电泳法(electrophoresis) 概念：带点质点在电场中与本身电荷相反的电极移动的现象。 氨基酸具有两性解离，PH值决定带电情况。 凝胶电泳 等点聚焦电泳 双向凝胶电泳 三、氨基酸的显色反应 概念 蛋白质是由一条或多条多肽(polypeptide)链以特殊方式结合而成的生物大分子。 蛋白质与多肽并无严格的界线，通常是将分子量在6000道尔顿以上的多肽称为蛋白质。 蛋白质分子量变化范围很大, 从大约6000到1000000道尔顿甚至更大 一、蛋白质分类 生物体内的作用不同 结构蛋白 功能蛋白：活性蛋白、信息蛋白 分子形状分 球状蛋白 纤维状蛋白 一、蛋白质分类 分子组成成分 1.单纯蛋白 (1)清蛋白、球蛋白：水，甘氨酸 (2)谷蛋白、醇溶蛋白：不溶于水 (3)精蛋白、组蛋白：碱性氨基酸，细胞核 (4)硬蛋白：纤维状蛋白，不溶于水、稀酸稀碱和有机溶剂，含大量胱氨酸 一、蛋白质分类 分