细胞工程大实验(上交版).docVIP

仲恺农业工程学院 课程学习报告 课程名称：细胞工程大实验 学期：2011-2012学年第一学期 实验一 培养基母液与培养基的配置 实验二 胡萝卜再生体系的建立 实验三 水稻再生体系的建立 实验四 水稻悬浮细胞系的建立 实验五 水稻遗传转化 实验六 烟草叶片的组织培养 实验七 百合组织培养 实验八 原生质体游离、融合与培养 实验九 玉米幼胚再生系统的建立 实验十 植物快速繁殖 院 系： 生命科学学院 班 级： 生技091 姓 名： 黄华如 学 号： 200910414129 实验一 培养基母液与培养基的配置 摘要：有些培养基需要的样品非常少，称量起来非常不准确，为了避免更大的误差，将三种培养基（MS、N6、B5）的各种成分，含大量元素、微量元素、有机成分、铁盐、肌醇、各种激素等，扩大倍数（1000倍、10000倍）配成母液，并根据所配培养基的种类、体积，选择母液并计算所需各种母液的体积，量取后剩余的各种混合液（母液）或单独配制药品，均应放入冰箱中保存，以免变质、长霉培养基的母液是指含有各种必需成分的液体混合物，可以一次配制，多次使用。根据配方，首先将含各种元素的盐类充分溶解，然后混合。倍数与用量成反比，也就是说凡是用量少的，配制的倍数可以大到100～1000倍，用量大的配制的倍数只要10倍，分别配制，然后按一般化学混合要求，错开阳离子（如钙离子）与阴离子（如硫酸根离子），以免混和后产生沉淀。铁盐母液要单独配制；氨基酸、维生素、生长激素等也要分别单独配制，如果不溶于水（如刚哚乙酸、赤霉素等），可用少量95％的酒精先行溶解，有些可以用氢氧化钠（如二氯苯氧乙酸）或盐酸（如苄基腺瞟呤）先行溶解，然后加水定容至一定浓度。配制的母液分别置于冰箱中备用。称量药品 根据培养基配方依次准确称取各种药品，放入适当大小的烧杯中，琼脂不要加入。蛋白胨极易吸潮，故称量时要迅速。 溶解 用量筒取一定量(约占总量的1/2)蒸馏水倒入烧杯中，加热，并玻棒搅拌，以防液体溢出。待各种药品完全溶解琼脂完全融化后才能停止搅拌后，停止加热，补足水分。调节pH 根据培养基对pH的要求，用5%NaOH或5%HC1溶液调至所需pH。测定pH可用pH试纸或酸度计等。 分装 液体分装高度以试管高度的1/4左右为宜。固体分装装量为管高的1/5，半固体分装试管一般以试管高度的1/3为宜；分装三角瓶，其装量以不超过三角瓶容积的一半为宜。 包扎标记 培养基分装后加好棉塞或试管帽，再包上一层防潮纸，用棉绳系好。在包装纸上标明培养基名称，制备组别和姓名、日期等。 灭菌 上述培养基应按培养基配方中规定的条件及时进行灭菌。普通培养基为121min，以保证灭菌效果和不损伤培养基的有效成份。培养基经灭菌后，如需要作斜面固体培养基，则灭菌后立即摆放成斜面，斜面长度一般以不超过试管长度的1/2为宜；半固体培养基灭菌后，垂直冷凝成半固体深层琼脂。 倒平板 将需倒平板的培养基，冷却到45～50,立刻倒平板。 [M]. 北京化学工业出版社2009. 实验二 胡萝卜再生体系的建立 摘要：本实验以胡罗卜为材料，用MS为基本培养基进行愈伤组织诱导，继而进行继代和分化培养，进而建立胡萝卜的再生体系。本组实验愈伤诱导率非常高，达到100%，出绿率也有100%，出苗率达到了90%。相比其他组，我们组的实验效果非常好，说明当其他试剂一样，激素2,4-D（0.2mg/L）和激素NAA（0.1mg/L）浓度的效果最好。因此，培养物地生长、分化方向地控制主要是通过添加不同种类和浓度的植物激素来实现的。 关键词：胡萝卜；再生体系；组织培养；分化 1前 言 胡萝卜(Daucuscarota L. )为伞形科二年生草本植物,是世界上最重要的蔬菜作物之一,栽培面积非常广泛,占蔬菜生产总量的3%,达1350万t[1]。其肉质根富含蔗糖、葡萄糖、淀粉、胡萝卜素及植物纤维,还含有大量的钾、钙、磷、铁等盐类,其中100g新鲜的胡萝卜中约含3 56mgβ胡萝卜素。愈伤组织是植物成熟细胞经过脱分化，不断增殖所产生的主要有薄壁细胞构成的不定型组织[2]。学习利用植物外植体诱导形成愈伤组织和愈伤组织分化培养的方法。通过学习植物细胞全能性，对胡萝卜进行愈伤组织诱导，继代，分化，最后发育形成完整植株，更好地了解植物细胞的全能性。 2材料与方法 2.1材料 新鲜胡萝卜 2.2方法 2.2.1胡萝卜愈伤诱导 2.2.1.1愈伤培养基 表1 胡萝卜愈伤组织诱导的配制 组别 基本培养基 6-BA 2,4-D（mg/L） NAA（mg/L） 糖（g/L） 琼脂（g/