胡萝卜愈伤组织的诱导培养.docVIP

本科学生综合性实验报告 学号 姓名 学院 生命科学学院 专业、班级 应生B 实验课程名称 植物组织培养 教师及职称 讲师 开课学期 2012 至 2013 学年 下 学期 填报时间 2013 年 5 月 2 日 云南师范大学教务处编印 实验名称 胡萝卜愈伤组织的诱导培养 实验时间 星期二 实验室 组培实验室 实验目的 （1）通过本次实验，能熟练、准确配制MS培养基母液和组培室常用的化学试剂，巩固相关理论基础知识。 （2）通过本次实验，熟悉配制培养基的流程及操作中应注意的事项，学会设计和筛选胡萝卜愈伤组织诱导培养基配方。 （3）通过本次实验，能够熟练掌握外植体的表面消毒技术和无菌操作技术。 （4）通过本次实验，掌握愈伤组织状态的调控手段，设计适合的使愈伤组织增殖快、结构疏松的增殖培养基，以便能培养出下次细胞培养的材料。 （5）通过本次实验，熟练掌握愈伤组织继代培养的基本操作技术。 实验原理 （1）培养基是植物离体培养组织和细胞赖以生存的营养基质。配制培养基时，为了减少试剂称取时的工作量和少量称取时出现的误差，以及避免多种营养成分混合导致沉淀产生或相互反应而失去培养效果，预先要将各种营养成分配制为一定倍数的培养基母液，待使用时稀释到要求的浓度。母液的浓度为培养基浓度的10倍、20倍、50倍、100倍等或更高。 （2）将事先配制好的培养基母液按一定比例稀释至浓度为培养基中规定的使用浓度，再加入琼脂、蔗糖、生长调节物质等，制备成符合要求的培养基。 （3）将胡萝卜的贮藏根（根的变态）表面消毒后切割成小块接种于愈伤组织诱导培养基上，诱导外植体脱分化产生愈伤组织。 （4）将由胡萝卜肉质直根诱导产生的愈伤组织剥离转接到愈伤组织增殖培养基上培养，即可实现愈伤组织的增殖。 实验流程 四、实验装置示意图 五、实验设备及材料 （1）实验用具和仪器 冰箱、普通天平、分析天平、各种型号的试剂瓶（棕色和白色）、移液管、量筒、烧杯、容量瓶、搪瓷杯、药勺、称量纸、玻棒、标签纸、pH试纸（pH5.4~7.0）、三角瓶、果酱瓶、封口膜、棉线、高压蒸汽灭菌锅、电磁炉、酒精棉球、小块纱布、已灭菌滤纸、枪状镊子、手术剪、解剖刀、已灭菌培养皿、酒精灯、超净工作台、恒温培养箱 （2）实验药品和试剂 硝酸铵、硝酸钾、氯化钙、硫酸镁、磷酸二氢钾、碘化钾、硫酸锰、硫酸锌、钼酸钠、硫酸铜、氯化钴、乙二胺四乙酸二钠、硫酸亚铁、甘氨酸、盐酸硫胺素、盐酸吡哆素、烟酸、肌醇、2,4-D(2,4-二氯苯氧乙酸)、NAA（α-萘乙酸）、 6-BA （ 6-苄基腺嘌呤）、 KT、浓盐酸、氢氧化钠、浓硫酸、重铬酸钾、95%酒精、蒸馏水、MS培养基母液、琼脂、蔗糖、生长调节物质、1mol·L-1HCl、1mol·L-1NaOH、胡萝卜愈伤组织诱导培养基、无菌水、75％酒精、0.1%HgCl2、愈伤组织继代培养基。 （3）实验材料 胡萝卜肉质直根 六、实验步骤及注意事项 （一）MS培养基母液和常用试剂的配制 MS 培养基的母液分为下面几个部分： 用量(mg)=培养基浓度(mg/L)*浓缩倍数*体积（L） 大量元素：1L，浓缩20倍。 （分别溶解） NH4NO3 KNO3 CaCl2*2H2O MgSO4*7H2O KH2PO4 （2）微量元素：1L，浓缩200倍。 KI H3BO3 MnSO4*4H2O ZnSO4*7H2O Na2*MoO4*2H2O CuSO4*5H2O CoCL2*6H2O （3） 有机物：250mL, 浓缩200倍。配制为单一母液。 肌醇 烟酸 盐酸吡哆醇 甘氨酸 烟酸硫胺素 （4） Fe盐：500mL，浓缩200倍。（配制溶