第八章 霉菌毒素检验（参考）.pptVIP

1.样品处理 准确称取切碎的均匀海带试样0.20-0.3g，移入瓷坩埚中，加入10mol/L KOH溶液1ml，置于电炉上炭化，然后置600℃高温炉灰化45min，取出放至室温。以40ml水分数次洗涤坩埚内容物，将洗涤液一并转入漏斗中。 2.加样测定 漏斗编号 1 2 3 4 5 6 7 水 （ml） 40 38 36 34 32 30 0 碘标准溶液 （ml） 0 2 4 6 8 10 0 KOH （ml） 1 1 1 1 1 1 0 H2SO4 （ml） 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 K2Cr2O7 （ml） 10 10 10 10 10 10 10 CHCl3 （ml） 10 10 10 10 10 10 10 721型分光光度计 TU－1810型分光光度计 752型分光光度计 752型分光光度计 五、752紫外-可见分光光度计操作步骤 1 通电开机预热30min。 2 调整合适的波长。 3 开机后自动显示在T％位置，开盖调0，若不为0则按0％键；然后关闭盖调100，若不为100则按0A/100％键；调整A/T/C/F键至Abs处调0，若不为0则按0A/100％键调0。 4 测样。 展青霉素（Patulin, Pat)毒性 3. 毒性作用 (1) 急性和亚急性毒性 啮齿类动物的急性毒性中毒：痉挛、肺出血、皮下组织水肿、无尿，死亡。 ??(2) 致癌、致畸和致突变性 皮下注射部位引起雄性大白鼠发生局部肉瘤，经口服的实验动物未发现致癌现象。Pat对大鼠和小鼠没有致畸作用，但对鸡胚有明显的致畸作用。 展青霉素（Patulin, Pat)毒性 (3)?细胞毒性：Pat能改变细胞膜的通透性，更利于K+外流。 (4) 对免疫系统的影响：亚致死剂量的Pat对小鼠和兔的免疫系统均有影响，Pat的免疫抑制作用是可逆的而且Pat对免疫球蛋白水平 的影响具有时间依赖性。 展青霉素的污染 食品中的主要来源：是由荨麻青素、扩张青素和棒曲霉等霉菌代谢产生的，存在于腐烂水果及果汁制品中。 品 种 指标(μg/Kg ) 半成品（原汁、原酱） ≤ 100 原汁、果酱 ≤ 50 果酒 ≤ 50 罐头 ≤ 50 山楂条（饼） ≤ 50 苹果和山楂制品中展青霉素限量卫生标准 4.2 双向薄层扫描测定法 原理：用乙酸乙酯提取果汁，用1.5％碳酸钠净化样品。经双向薄层展开分离后，用薄层扫描仪进行紫外反射光扫描定量。 样品处理：鲜果、果酱加适量无水硫酸钠研磨吸收多余水分，加乙酸乙酯震荡提取过滤，滤液加稀碳酸钠振摇去杂质，乙酸乙酯在水浴上真空减压浓缩近干，用少许三氯甲烷定容供TLC用。果汁、果酒直接提取。 测定：在薄板上滴加标准液、样品液。在样品点同一垂直线上距顶端2cm处点标准液，作为位置参考点。先用横展剂三氯甲烷-丙酮横向展开后再用甲苯-乙酸乙酯-甲酸纵向展开，254nm下观察，若在Rf 0.35处有黑色斑点需做确证实验。将薄板喷3-甲基，2-苯并噻唑酮腙盐酸溶液，135℃烘烤15min，360nm下观察，呈橙黄色斑点即可确认。稀释后点样使其在线性范围内，双向展开后进行扫描定量。 最低检出限3μg/L。 图3.9 β-(1,3)-D-葡聚糖水解产物的层析 水解产物与标准葡萄糖、果糖、蔗糖、木糖溶液对照进行薄板层析，展开剂为正丁醇：无水乙醇（酸）：水＝4:1:5（V/V，上层液），以苯胺－邻苯二甲酸为显色剂，得到右图。 镰刀菌毒素 1. 单端孢霉烯族类 （T-2毒素、脱氧雪腐镰孢菌烯醇等） 2. 玉米赤霉烯酮类 3. 丁烯酸内酯 4. 串珠镰刀菌素 单端孢霉烯族化合物 1）主要产毒菌株：镰刀菌属 2）结构与性质 基本结构：倍半萜烯 毒性化学结构：C－12，C－13环氧基 3）性质：稳定、烹调过程不易破坏 碱性条件下次氯酸钠可使之失去毒性。 单端孢霉烯族化合物种类与毒性 种类：40余种 毒性作用： 共同特点表现为较强的细胞毒性、免疫抑制及致畸作用，部分有较弱的致癌性， 急性毒性强，可致人与动物的呕吐。 第五节 脱氧雪腐镰刀菌烯醇和雪腐镰刀菌烯醇的检验 5.1 概述 5.2 脱氧雪腐镰刀菌烯醇的薄层色谱测定法 5.3 酶联免疫吸附测定法 5.4 薄层色谱法（同时测定） 5.1概述 理化性质：镰刀菌属产生的有毒代谢产物主要是单端孢霉素类，只含有C、H、O三种元素。谷物种天然污染的有A、B两型，12、13碳原子上形成的环氧基可能为毒性的化学基础。 脱氧雪腐镰刀菌烯醇（deoxynivalenol，DON