1培养基的配制灭菌终稿.pptVIP

实验一 培养基的配制与灭菌 一、实验目的 1、了解培养基的配制原理，并掌握配制培养基的具体方法和步骤; 2、了解高压蒸汽灭菌原理，并掌握高压蒸汽灭菌操作步骤。 2.高压蒸汽灭菌高压蒸汽灭菌是把待灭菌物品放在一个密闭的高压蒸汽灭菌锅中，当锅内压力为100Pa时，温度可达到121℃，一般维持20min，即可杀死一切微生物的营养体及其孢子。高压蒸汽灭菌是依据水的沸点随水蒸汽压的增加而上升，加压是为了提高水蒸汽的温度。 有立式、卧式、手提式三种。 灭菌器上装有温度计、压力表；排气口、安全活塞。如果压力超过一定限度，活塞的阀门便自动打开，放出过多的蒸汽。高压蒸汽灭菌技术关键是在压力上升之前排尽冷空气。若锅内有未排除的冷空气，压力表虽指100Pa，但锅内温度实际只有100℃，结果造成灭菌不彻底。 2. 高压蒸汽灭菌: ①向锅内加水：打开锅盖，向锅内加适量水。水量不足，灭菌锅易蒸干。 ②放入待灭菌物品：将待灭菌物品放入灭菌桶内，物品不要放得太紧和紧靠锅壁，以免影响蒸汽流通和冷凝水顺壁流入灭菌物品。 ③盖好锅盖：将盖上的软管插入灭菌桶的槽内，有利于罐内冷空气自下而上排出，加盖，上下螺栓口对齐，采用对角方式均匀旋紧螺栓，使锅密闭。 ④ 排放锅内冷空气： a.可将排气阀打开，待排出大气后关闭排气阀； b.关闭排气阀，待压力上升到0.5kg/cm2时再打开排气阀，待压力回复到0时再关闭排气阀。(瓶装液体不能超过1/2) ⑤升温(压)灭菌： 温度随蒸汽压力增高而上升，待压力逐渐上升至所需温度时，控制热源，维持所需压力和温度，并开始计时，一般培养基控制在121℃灭菌20min；含糖等成分培养基控制在115℃Pa灭菌30min或121℃ Pa灭菌20min，关闭热源，停止加热，压力随之逐渐降低。 ⑥灭菌完毕降温及后处理： 待压力降至0时，慢慢打开排气阀（排汽口），开盖，立即取出灭菌物品。 在压力未完全降至0处前，不能打开锅盖，以免培养基沸腾将棉塞冲出；也不可用冷水冲淋灭菌锅迫使温度迅速下降。所灭物品灭菌完毕后立即开盖，以免凝结在锅盖和器壁上的水滴弄湿包装纸或落到被灭菌物品上，增加染菌率。可用余温将打湿的报纸烘干。斜面培养基自锅内取出后要趁热摆成斜面，倒平板灭菌后的空培养皿、试管、移液管等需烘干或晾干。若连续使用灭菌锅，每次需补足水分；灭菌完毕，除去锅内剩余水分，保持灭菌锅干燥。 实验报告内容 　　说明该实验目的；实验原理；实验材料和器皿；实验方法和步骤以及注意事项。 * * 二、实验原理 培养基是由人工配制的适合微生物生长繁殖和累积代谢产物的混合养料。其营养成分包括碳源、氮源、能源、无机盐、生长因子以及水等六大要素。根据各种微生物的特点及实验目的选用合适的培养基，并需要pＨ值调到合适的范围。配制的培养基都需要经过灭菌后才能使用。 必须满足六大要素! 细菌（牛肉膏蛋白胨培养基）：pＨ７.4-7.6 牛肉膏 5g 蛋白胨 10g NaCl 5g H2O 1000ml 三、实验材料 药品：牛肉膏、蛋白胨、氯化钠、琼脂 其它：手提式高压蒸汽灭菌锅、天平、牛角匙chi/、称量纸、电炉、1M HCl、1M NaOH、pH试纸、烧杯、量筒、漏斗、漏斗架、铁架台、玻棒、三角瓶、试管、培养皿、吸管、各种包装纸、标签、线绳、棉花、纱布、剪刀等。 四、操作步骤 1.培养基配制： ①称量：在烧杯中加入所需水量，按照配方正确称取各种原料放于烧杯中。（每组200ml） 牛肉膏在称量纸上或烧杯中称量，可用玻棒挑取； 蛋白胨易吸潮，称量快速，加盖放回原处； 药勺不能混用， ⑤分装：注意不要污染棉塞。 a.试管分装： 不超过总量的3/5，大约为5ml b.三角瓶分装 琼脂融化与灭菌可同时进行，装量为总容量的1/2～3/5 ②溶化：玻棒搅匀，加热溶解。加琼脂溶化，加热过程中要不断搅拌，适当补水定容。 ③调pH值：用 NaOH或HCl调pH，用pH试纸对照。 ④过滤（可省略） ⑦灭菌备用：培养基灭菌后必须在37℃下恒温培养24h，确定无菌生长，方可使用。 ⑥包扎成捆：外包牛皮纸或旧报纸，防止冷凝水打湿棉塞，或防止存放过程中散落灰尘和微生物。挂上标签注明何种培养基，日期。 无菌试验 可抽少数灭过菌的培养基置37℃恒温箱中培养24h，若无菌生长，即视为灭菌彻底，可保存备用。 五、实验注意事项： 1. 称量药品时，药匙不要混用；称完药品后应及时盖 好瓶盖。 2. 调pＨ值时要小心操作，尽量避免回调而带入过多 的无机离子。 3. 配制固体或半