苦参素对成纤维细胞增殖、形态学及转化生长因子β1的影响.docVIP

苦参素对成纤维细胞增殖、形态学及转化生长因子β1的影响 　　［摘要］　目的：研究苦参素对成纤维细胞增殖、形态学及转化生长因子β1(TGF-β1)表达的影响，阐明其抗肝纤维化的作用机制。方法：用甲基噻唑基四唑MTT(methyl thiazolyl tetrazolium)比色法、HE染色及免疫细胞化学技术分别检测小鼠皮肤成纤维细胞(NIH3T3)增殖、形态学及TGF-β1的表达。结果：苦参素能明显抑制成纤维细胞增殖及TGF-β1的表达，并呈剂量依赖性。结论：苦参素可通过抑制成纤维细胞增殖及TGF-β1的表达而起到抗肝纤维化作用。 　　 Affect of kwoninone on fibroblastic proliferation, morphology and expression of TGF-β1 　　［ABSTRACT］　AIM:To study the affect of kwoninone on fibroblastic proliferation, morphology and expression of transforming growth factor-beta (TGF-β1) and elucidate its mechanism in fibrosis.　METHODS: The proliferation, morphology and expression of TGF-β1 of fibroblast was measured by MTT bioassay, HE dyeing and immunocytochemistry.　RESULTS: The kwoninone has an could significantly inhibit fibroblastic proliferation, growth and expression of TGF-β1 in concentration-dependent manner.　CONCLUSION: The kwoninone anti-hepatic fibrosis effect through inhibiting fibroblastic proliferation, growth, and expression of TGF-β1. 　　［KEY WORDS］　kwoninone; fibroblasts; transforming growth factor beta; sophora subprastrata 　　苦参素(k woninone)，是从中药广豆根(Sophora Subpsostarata)中分离所得生物碱类，具有抗炎、抗菌、抗病毒、抑制免疫、抗肿瘤等生物学作用［1］。近来有研究报道，用它治疗慢性肝炎，可有效的降低ALT、改善临床症状、并使乙型肝炎及丙型肝炎病毒标志物转阴、减轻炎性细胞浸润及肝细胞坏死，另具有防治肝纤维化作用［2-4］。本研究以小鼠皮肤成纤维母细胞(NIH3T3)为靶细胞，从细胞及细胞因子水平研究苦参素对成纤维细胞增殖、生长及转化生长因子β1(TGF-β1)表达的影响，以期从细胞及细胞因子水平阐述苦参素抗肝纤维化作用机制，为临床用于肝纤维化的防治提供更多的理论基础。 　　材料与仪器　靶细胞：NIH3T3细胞株(购于中国科学院上海细胞所)。苦参素注射液(2 mL:200 mg，批号980215，上海第一生化药业公司)，RPMI1640培养基、小牛血清、胰酶、甲基噻唑基四唑(MTT，华舜生物试剂公司)，二甲基亚砜(DMSO)，苏木精染液，伊红染液；TGF-β1免疫组织化学染色试剂盒，DAB显色试剂盒。B5060EX二氧化碳培养箱(德国Heraeus公司产品)，37XAZ倒置生物显微镜(上海光学仪器厂)，Olympus光学显微镜，DG-3022型酶联免疫检测仪(南京华东电子管厂)，YS-875A净化工作台。 　　方法 　　1　MTT法检测不同浓度的苦参素对NIH3T3细胞增殖的影响　用0.25%胰蛋白酶消化单层培养NIH3T3细胞，用含10%的小牛血清RPMI1640培养液稀释为单个细胞悬液(5×107个·L-1)，接种于96孔培养板，每孔100 μL，同时每孔加入经培养液倍比稀释的苦参素100 μL，至苦参素终浓度分别为31.3，62.5，125，250，500，1000 mg·L-1，每种浓度设3个复孔；并设对照孔3个，不加苦参素，而加入等量的培养液；另设空白对照孔3个，不加细胞，其他条件与前相同。同时，在相同条件下用同样方法再接种另2块96孔培养板。将培养板移入CO