肾移植术后受者体内微嵌合状态的研究.docVIP

肾移植术后受者体内微嵌合状态的研究 【摘要】 目的:探讨肾移植术后受者体内微嵌合状态与移植肾功能、排斥反应之间的关系。方法:采用对人类性别决定基因SRY扩增的巢式PCR方法， 对接受79例男性供肾的女性肾移植患者外周血的微嵌合进行检测分析。结果:总的微嵌合发生率为55.70% (44/79)，其中移植后6个月内微嵌合的发生率为35.71%，6～18个月内发生率为46.67%， 18个月以上发生率为71.43%。10例患者术后14 d至6个月连续观察发现微嵌合的出现呈波纹式动态变化。嵌合阳性患者的排斥反应发生次数明显少于嵌合阴性患者(Plt;0.05)，但二者血肌酐值差别无显著性(Pgt;0.05)。结论:微嵌合阳性患者的排斥反应发生率明显降低。 【关键词】 肾移植 微嵌合 嵌合状态 移植物排斥 Abstract: Objective:To investigate the relationship among microchimerism, allograft function and the incidence of rejection after renal transplantation. Methods: Peripheral blood microchimerism was analyzed in 79 female recipients by means of nest PCR with primers from a sex determining region of Y chromosome. Results: Microchimerism was detected in 44 cases of 79 recipients (55.70%).The incidence of microchimerism was 35.71% in 0～6 month, 46.67% in 6～18 month and 71.43% beyond month 18, respectively. The occurrence of microchimerism in 10 recipients, periodically monitored from day 14 to month 6, dynamically fluctuated in waves. The incidence of rejection episodes in positive microchimerism recipients was lower than that in negtive ones(Plt;0.05), but no significant difference was found in any comparison of creatinine value (Pgt;0.05). Conclusion: Peripheral blood microchimerism is frequently detected in recipient with long-term survival and associated with low incidence of rejection. Key words: kidney transplantation; microchimerism 微嵌合现象作为当前免疫抑制下器官移植出现的新特点已得到证实， 但有关微嵌合与免疫耐受状态间的关系看法不一。本研究旨在用对人类性别决定基因SRY扩增的巢式PCR方法，分析微嵌合的发生、发展，探讨它与移植肾功能、排斥反应及免疫耐受状态间的关系。 1 材料和方法 1.1 一般资料 2003年1月至2005年6月，79例接受男性供肾的女性肾移植患者作为研究对象，年龄19～69岁，平均（41.5±13.8）岁。其中71例有妊娠史，胰肾联合移植1例，肝肾移植1例，其供肾均为青年男性。病程在移植术后6个月以内者14例，6～18个月者30例，18个月以上者35例。 1.2 标本采集 采集门诊随访女性患者外周血抗凝血2 ml，立即提取DNA，保存于-20 ℃。其中10例患者为连续观察，在术后第14天开始连续采集标本至第6个月。对所有患者采集标本的同时检测血肌酐值。 1.3 外周血DNA提取 患者DNA提取采用盐析法（DNA Isolation Kit，Gentra公司生产）。取300μl全血加入0.98%的NH4Cl 1 ml破红细胞膜10 min，离心后取白细胞加入300μl细胞裂解液，充分混匀后放置10 min；加入蛋白质沉淀液150μl充分混匀,离心5 min(12000