遗传学实验讲义(16年修改)..docVIP

实验一、果蝇的饲养与形态观察 一、果蝇简介 果蝇是在世界各地常见的昆虫，属于昆虫纲，双翅目，果蝇科，果蝇属。果蝇属有3000多种，我国已经发现800多种，遗传学研究中通常用的是黑腹果蝇（Drosophila melanogaster）。作为遗传学研究的材料，果蝇具有非常突出的优点，它形体小，生长迅速，繁殖率高，饲养方便，世代周期短，约12 d就可繁殖一代，突变性状多，染色体数目少，基因组小，实验处理十分方便，容易重复实验，便于观察和分析。果蝇的遗传学研究广泛而深入，尤其在基因分离、连锁、互换等方面十分突出，为遗传学的发展作出了突出的贡献。目前果蝇仍然是遗传学、细胞生物学、分子生物学、发育生物学等研究中常用的模式动物。 二、实验目的 1. 掌握果蝇的基本特征及鉴别雌雄果蝇的方法，熟悉常见突变型。 2. 了解果蝇生活周期特征及各阶段的形态变化。 三、实验材料 仪器设备：显微镜、指型管、毛笔。 药品与试剂：乙醚、玉米粉、酵母粉、蔗糖、丙酸。 四、实验内容和步骤 1. 生活周期的观察 果蝇的生活史：果蝇与家蝇是不同的种，是完全变态昆虫，其完整的生活周期可分为4个明显的时期，即卵、幼虫、蛹和成虫。用放大镜从培养瓶外即可观察到这四个时期，也可取出用立体解剖镜仔细观察。 果蝇的生活周期长短与温度关系很密切，低温使生活周期延长，生活力减低，高于30℃使果蝇不育甚至死亡。果蝇培养的最适温度为20～25℃，25℃培养条件下果蝇从受精卵到成虫约10 d，其中卵和幼虫期5 d，蛹4 d。成虫果蝇在25℃条件下约成活15 d。 卵：受精卵白色，椭圆形，腹面稍扁平，长约0.5 mm，在前端背面伸出一触丝，它能使卵附着在食物上。 幼虫：受精卵经24 h就可孵化成幼虫，幼虫经两次蜕皮到第三龄期体长可达4～5 mm。肉眼观察可见幼虫一端稍尖为头部，上有一黑色的钩状口器。 蛹：幼虫生活4 d左右即开始化蛹。化蛹前三龄幼虫停止摄食，爬到相对干燥的表面，如培养瓶壁，渐次形成一个菱形的蛹，起初颜色淡黄、柔软，以后逐渐硬化变成深褐色，此时即将羽化。 成虫：刚从蛹壳中羽化出来的果蝇，虫体较肥大，翅膀还未展开，体表也未完全几丁质化，所以呈半透明的乳白色。透过腹部体壁还可以观察到消化道和性腺。约1 h后，蝇体即变为粗短椭圆形，双翅伸展，体色加深，如野生型果蝇初为浅灰，后变成灰褐色。 成虫果蝇羽化后8 h即可交配。雄果蝇的精子可贮存于雌果蝇的受精囊，以后逐渐释放到输卵管，雌蝇2 d后即开始产卵，最初几天每天可产50～70个，随后逐渐减少。 2. 果蝇的形态特征和常见突变的类型 果蝇的雌雄性别的鉴别 果蝇有雌雄之分，幼虫时很难区别，但成虫区别很容易。雄性的腹部环纹5节，末端钝而圆，颜色深。第一对足的跗节前端表面有黑色鬃毛流苏，称性梳；雌性腹部环文7节，末端尖，颜色浅，跗节前端无黑色鬃毛性梳。雄性个体一般比雌性小。 一些常见的突变性状 果蝇的突变性状很多，已知的达几百种，并且随着研究的深入会发现或诱变产生更多的突变性状。果蝇的许多突变都是明显而且稳定的，大多是形态变异，容易观察。 3. 果蝇的麻醉的方法 对果蝇进行检查时，一般用乙醚进行麻醉，使其保持静止状态。由于果蝇对乙醚比较敏感，因此麻醉时应根据实验要求而定，作种蝇以轻度麻醉为宜，做观察时可深度麻醉，致死也可。麻醉程度是实验成功与否的关键步骤，麻醉不够，果蝇就会飞掉，麻醉过头又会杀死果蝇。果蝇翅膀外展45度角表示已经死亡。 麻醉的操作步骤如下： 1) 轻摇或轻拍培养瓶使果蝇落到培养瓶底部。 2) 右手两指取下培养瓶塞，迅速将麻醉瓶口与培养瓶口对接严密。 3) 左手握紧两瓶接口处， 倒转使培养瓶在上。 4) 紧握两瓶接口，使两瓶稍微倾斜，右手轻拍培养瓶将果蝇振落到麻醉瓶中。注意不要让培养瓶中的培养基掉入麻醉瓶中，如培养基已变得太稀而易脱落，可采用麻醉瓶在上，而用黒纸或双手遮住培养瓶，使果蝇趋光自动飞入麻醉瓶中。 5) 当果蝇进入麻醉瓶后，迅速分开，将两瓶各自盖好。然后再将麻醉瓶的果蝇拍到瓶底，迅速拔开塞子，在塞子上滴几滴乙醚，重新塞上麻醉瓶。 6) 观察麻醉瓶中的果蝇，约半分钟后果蝇便不再爬动，转动瓶子，果蝇在瓶壁上站不稳，麻醉就算成功了，即可倒在白瓷板上进行观察。 7) 果蝇麻醉状态通常可维持5～10 min，如果观察中苏醒过来，可进行补救麻醉，即用一平皿，内贴一带乙醚的滤纸条，罩住果蝇形成一临时麻醉小室。 4. 果蝇培养 将果蝇移入新培养瓶时，须将瓶横卧，并在培养基上薄博铺上一层玉米粉，然后接入5～10对果蝇，待果蝇清醒后，再把培养瓶竖起，以防果蝇粘在培养基上。 果蝇培养基 A：糖6.2 g，加琼脂0.62 g，再加水38 ml。煮沸溶解。 B：玉米粉8.25 g，加水38