过CreloxP重组酶系统对四膜虫基因N端进行表位附加的构建.pptVIP

通过Cre/loxP重组酶系统对四膜虫基因N端进行表位附加的构建文献选自：Busch et al BMC Microbiology 2010, 10:191 制作人：凌发忠 学号：D201002034 contents 一. 背景知识 二. 内容介绍 三. 结论 一. 背景知识 表位附加标记(epitope tag) ,就是将附加的抗原表位融合到目的蛋白以检测目的蛋白的表达 ,同时还可以通过亲和层析法来纯化目的蛋白及利用免疫荧光技术对标记蛋白进行亚细胞定位。 本文使用表位附加标记是HA和EGFP。 HA 标记一般由 9 个氨基酸组成 ,它来源于流感病毒的血凝素(hemagglutinin ,HA) ,相对应 HA 的单克隆抗体是 12CA51。 EGFP（增强型绿荧光蛋白）：在原核或真核细胞中表达并受到蓝光或紫外光辐照时就可发出亮绿色荧光。 目前对四膜虫C端蛋白标记技术已经完成，多数情况下蛋白标记位于C端，这样抗药的标记很少会干扰到N端的启动子。但其N端蛋白标记技术仍有研究的需要。作者先前试验中发现有些蛋白在C端标记时出现功能异常或干扰与其他蛋白的相互作用等。 N端蛋白标记考虑的方面： 1.不会干扰启动子的功能 2.不会影响下游基因的正确翻译 3.基因同源重组时N端的表位附加不会丢失 Cre/loxP重组酶系统可以解决上述问题 C