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专题71 微生物的培养与应用【基础回顾】 考点一、培养基 　(1)概念：人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质。 　(2)营养构成：一般都含有水、碳源、氮源和无机盐。此外，还需要满足微生物生长对pH、氧气以及特殊营养物质的要求。 　(3)种类：按照物理性质可分为液体培养基和固体培养基。 　(4)培养基的配制原则 　 考点二、无菌技术 　(1)含义：指在培养微生物的操作中，所有防止杂菌污染的方法。 　(2)关键：防止外来杂菌的入侵。 　(3)方法：灭菌、消毒 考点三、大肠杆菌的纯化培养 　(1)制备牛肉膏蛋白胨固体培养基 　计算→称量→溶化→灭菌→倒平板 　(2)纯化大肠杆菌的方法 　①纯化培养原理：在培养基上将细菌稀释或分散成单个细胞，使其长成单个的菌落，这个菌落就是一个纯化的细菌菌落。 　②纯化大肠杆菌的关键步骤：接种。 　③常用的微生物接种方法有两种 　a．平板划线法：是通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。 　b．稀释涂布平板法：是将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，进行培养。 　(3)菌种的保存方法 　①对于频繁使用的菌种，可以采用临时保藏的方法。 　②对于需要长期保存的菌种，可以采用甘油管藏的方法。 考点四、土壤中分解尿素的细菌的分离与计数 　1．分离原理：土壤中的细菌之所以能分解尿素，是因为它们能合成脲酶，这种物质在把尿素分解成无机物的过程中起到催化作用。 　2．统计菌落数目：统计样品中的活菌一般用稀释涂布平板法。 　3．实验流程：土壤取样→样品的稀释→微生物的培养与观察→细菌的计数。 考点五、分解纤维素的微生物的分离 　1．纤维素酶 　纤维素酶是一种复合酶，它包括C1酶、CX酶和葡萄糖苷酶，具有催化分解纤维素的作用，其作用过程如下： 　 　2．纤维素分解菌的筛选原理 　 　红色消失，出现透明圈即可根据是否产生透明圈来筛选纤维素分解菌。 　3．土壤中纤维素分解菌的筛选流程 　土壤取样→选择培养→梯度稀释→将样品涂布到鉴别纤维素分解菌的培养基上→挑选产生透明圈的菌落。 【技能方法】 1．培养基的类型及作用 2．配制牛肉膏蛋白胨固体培养基注意事项 　①倒平板的温度一般在50℃左右适宜，温度过高会烫手，过低培养基又会凝固。 　②平板需倒置，这样既可使培养基表面的水分更好地挥发，又可防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。 3．平板划线法与稀释涂布平板法。 　①平板划线法：平板划线法中细菌的分离和稀释过程发生在接种环在固体平板表面上的移动划线过程中。在线的开始部分，微生物往往连在一起生长，随着线的延伸，菌数逐渐减少，最后可能形成纯种的单个菌落。(如下图) 注意:a．划线时最后一区域不要与第一区域相连。 b．划线用力大小要适当，防止用力过大将培养基划破。 　②稀释涂布平板法 　Ⅰ.系列稀释操作(图1) 　a．将分别盛有9 mL水的6支试管灭菌，并按101～106的顺序编号。 　b．用移液管吸取1 mL培养的菌液，注入101倍稀释的试管中。用手指轻压移液管上的橡皮头，吹吸3次，使菌液与水充分混匀。 　c．从101倍稀释的试管中吸取1 mL稀释液，注入102倍稀释的试管中，重复b步混匀操作。以此类推，直到完成最后1支试管的稀释。 　 　图1 　Ⅱ.涂布平板操作如图2所示： 　图2 　注意:稀释涂布平板操作复杂，各个细节均应保证“无菌”。具体如下： 　①酒精灯与培养皿的距离要合适； 　②吸管头不要接触任何其他物体； 　③吸管要在酒精灯火焰周围使用。 4、消毒与灭菌比较 　 　(1)高温加热灭菌，其原理就是使细菌体内蛋白质变性，而达到杀灭细菌的作用。 　(2)化学药剂的灭菌消毒方法，其作用原理是使细菌体内蛋白质变性，但是化学物质很难透过孢子或芽孢的坚硬外层进入细胞内，因此化学方法难以消灭孢子和芽孢。 　(3)体积分数为70%的乙醇杀菌效果最好。浓度过低，杀伤力弱；浓度过高，使菌体表面蛋白质凝固形成一层保护膜，乙醇分子不能渗入其内，杀菌效果受影响。对刚洗刷后未干的器皿则可选择75%的酒精进行消毒。 　(4)灭菌的目的：无菌技术除了用来防止实验室的培养物受其他外来微生物污染外，还能有效避免操作者自身被微生物感染。 　(5)培养基的制作是否合格的验证：如果未接种的培养基在恒温箱中保温1～2天后无菌落生长，说明培养基的制备是合格的，否则需要重新制备。 【基础达标】 1．下列无菌操作中，错误的是(　　) 　A．无菌操作的目的是防止杂菌污染 　B．用酒精擦拭双手的方法对操作者进行消毒 　C．实验操作过程应在酒精灯火焰附近进行 　D．玻璃器皿(吸管、培养皿)可用酒精擦拭 【答案】D 【解析】 　对操作者应用较温和的方法进行消