第五讲-配位化学-研究方法讲解.ppt

x-ray晶体结构测定法 扩展x-ray吸收精细结构谱（EXAFS） 10-18s注 高分辨率核磁共振谱 10-1-10-9 s 电子顺磁共振谱 10-4-10-8 s 紫外-可见吸收光谱 10-14-10-15 s 红外光谱 10-13s 圆二色谱与磁圆二色谱 穆斯鲍尔谱 10-7s 磁性测量 电化学方法 热化学方法 荧光光谱 分子动力学方法 注：此数字为时标，估算方法 1/ν或c/λ x-ray晶体结构测定法 最重要，但非常困难，几百个 步骤：分离纯化——结晶（修饰、电解质、 失重）——收集衍射数据并解析结构 特点：1）最直接有效的结构分析方法 2）静态的，不一定与溶液中构象同 3）分辨率、尺度和结构信息 4）耗时长，几个月到几年 结 晶 困难及其解决 分离纯化并得到生物大分子的晶体，化学修饰——由链状变成更易紧密堆积的球状，在电子密集金属试剂的溶液中结晶 扩展x-ray吸收精细结构谱（EXAFS） 直接测定金属蛋白中金属中心的技术，非晶态、液体、直接样品皆可，键长信息(±0.01?)，键角不可 原理：用同步辐射加速器产生的高强度x射线激发原子的内层电子(1s——K边吸收； 2s, 2p——L边吸收)到外层空轨道，所产生的连续吸收光谱 方法： x射线吸收边(吸收起点)的能量可确定待测金属离子的氧化态； x-ray吸收精细结构可给出金属离子电离的电子波与其周边原子相互作用的信息，由此得到金属的配位信息。 具体应用：红氧还蛋白(一种铁硫蛋白)，修正了x-射线晶体结构的错误。 a b 红氧还蛋白的广延x射线吸收精细结构 1—实验光谱；1a—用初始结晶学数据计算得到的光谱； 2b—假设Fe-S距离相等所得到的计算光谱 高分辨率核磁共振谱(NMR) 原理： 应用及特点： 1）研究过溶菌酶、细胞色素C、细胞色 素C3、磷酸-丙酮同分异构酶等 2）动态的、溶液中、相当于2?分辨率的 x-ray衍射结构。 3）结构信息：证实溶液中溶菌酶的主 折叠与晶体中类似 4） 分子的指纹信息： 可应用其迅速比较蛋白质结构特征。 证实白血病溶菌酶与鸡蛋清溶菌酶 活性部位密贴相关 5）动力学方面的应用：高分辨率、宽时 标。测定{Fe4S4(SR)4}2-, 3-核心的电子自 交换速率为3×106(mol/L)-1·s-1。 6）研究的蛋白质的分子量尚不能太大， 近4万，预计6万 7）金属离子的NMR谱： 顺磁性的金属离子引起的谱线宽化可用于获得远离活性中心的基团的信息和确定水对金属酶活性中心的亲和力。 用于探针研究： 顺铂抗癌药物中195Pt NMR的研究； 113Cd作为探针取代Zn酶中的Zn，得到其配位环境的信息； 金属硫蛋白中113Cd NMR的研究证实其中有7种配位环境。 例：碱性磷酸酯酶 二聚 E + 113Cd 113Cd NMR 一个峰，δ117.2ppm， 配位环境同 E + 113Cd + S 113Cd NMR 两个峰，δ142ppm和δ55ppm 配位环境不