浆片细胞程序性死亡的二氧化碳机理研究.docVIP

二氧化碳诱导浆片细胞程序性死亡机理研究 刘伟元（M05307） 导师：金银根教授 在我国，杂交水稻的年种植面积约1600万公顷，占水稻种植面积的50%、全球水稻种植面积的10%以上。PCD过程相比，浆片吸胀和萎缩过程中细胞的形态与结构变化有一定的特殊性或独立性，是研究植物PCD过程及其相关因素的理想材料。 1 选题依据 虽然我们已经知道：在水稻、小麦、大麦、玉米等作物的开花过程中，其浆片的形态结构和生理生化变化的大致特征，也知道CO2能够促进和调节水稻等作物的开花。但我们并不清楚水稻等作物开花过程中，浆片活动和凋亡过程的本质，CO2与浆片细胞的凋亡过程的效用本质是什么？什么因素影响和作用于浆片细胞的活动和凋亡？通过什么途径或方法才能有效调节和控制禾本科作物的开花等，通过研究浆片细胞PCD响应过程中“多膜体”的形成机制，分析CO2和含碳有机酸促进开花过程的效应机制，不仅能丰富和发展细胞生物学、生物化学与分子生物学、植物结构和生殖生物学及植物发育学的理论，而且有助于研究出调节和控制开花的技术方法。 1.1 浆片的解剖结构 金银根、王忠等[5，14]研究表明：水稻、大麦、小麦等的浆片由表皮、基本组织薄壁细胞和辐射状分布的维管束构成。浆片表皮层细胞外壁厚、有角质层、没有气孔（器），与浆片吸胀过程中产生最大膨压有关。与不育系相比，可育系浆片的基本组织薄壁细胞含更丰富的原生质、细胞器（线粒体、质体）和贮藏物质，如淀粉粒等；育性不同，浆片维管束数目亦有明显差异，表现为：与不育系相比，可育系浆片维管束数目多，其筛管、导管也多，导管是浆片吸胀和萎缩过程中物质吸收和撤离的重要通道。 1.2 浆片在开花过程中的生理生化特征 在开花过程中，浆片细胞的呼吸强度增强，有明显的CO2释放峰，淀粉等物质水解、可溶性糖含量增加，细胞水势下降而渗透性吸胀，体积与鲜干重明显上升。在闭花过程中，浆片细胞的K+、Ca2+浓度提高；细胞核发生形变，呈变形虫状，核质凝缩、核内物质降解液泡化；质体、线粒体内膜及内溶物相应解体甚至空胞化等 [3，22]。液泡包围脂质体、或降解中的线粒体、蛋白体、淀粉体，产生吞噬泡逐渐将其消化，形成多层膜构成的“多膜体”结构；或内质网包围降解中胞基质、线粒体、质体等，形成多膜体。浆片细胞在开花过程中的这种变化是浆片细胞的自溶过程[14]，也是细胞的自主性凋亡过程[5]，或是细胞的程序性死亡过程 [18，21]。 在浆片细胞的凋亡过程中，细胞的水分和降解物通过其导管向小穗轴撤离，浆片萎缩、小花关闭[1-14]。用浓度为5%的CO2和含碳有机酸、茉莉酸甲酯[10]、呼吸促进剂、温汤浸泡、变温、摩擦等处理穗部均能明显促进水稻等作物的开花，相反则抑制或推迟开花[1-14]。 王忠、金银根等人的研究指出：野败型不育系水稻开闭颖慢的原因是浆片中维管束发育不良、缺乏导管、颖花呼吸弱、细胞自溶缓慢[13，14]；同时还发现≥５％ CO2气体（或ｐＨ值小于5.6 CO2水溶液）、浓度为１％的含碳有机酸(pH 5左右)处理稻、麦穗0.5~2分钟，对开花有着显著的促进作用。认为：CO2通过“酸生长效应”产生的H+破坏了细胞壁中多聚物间的相互作用和连接，或激活了胞壁松弛酶的活性[16，27]，引起浆片细胞胞壁松弛,有利其吸胀而促进开花[12，13]。 1.3 浆片与开花的分子生物学研究 (PTP)及Ca2+通道，随着细胞内Ca2+的增加,Ca2+通道开放，可能启动了PCD过程。在细胞PCD过程中，质膜脂双层改变二侧不对称性，磷脂酰丝氨酸暴露于细胞表面，从而导致被吞噬。 近年来还发现线粒体跨膜电位与线粒体通透性改变在细胞凋亡过程中起重要作用，凡是能够专一作用于线粒体诱导PTP孔生成的物质，例如苯并二嗪受体的配基原卟啉IX等都能引起细胞凋亡。 也有人认为植物细胞PCD过程，与Caspase酶系有直接关系，正是这种酶改变了线粒体的通透性，控制着细胞PCD的信号传导和实施过程 [22，28，30]，或者Caspase与PCD过程中降解原生质的酶系统形成有关[23]。 从分子生物学的角度研究植物细胞的死亡过程表明：细胞的DNA分子去甲基化与PCD过程有关[28]，且以180-200 bp倍增的DNA 条带形成和原位末端标记法标记出DNA断裂过程中产生的3’-羟基末端为检测PCD的有效指标[17，31]。此外，Massium ,Olg,Siobhan等认为：DNA的甲基化改变与病毒、病菌的侵染、过量核辐射、铬等重金属胁迫等有关，受激素的调节[15]。 2 研究内容 浆片控制开花的本质是浆片活动和凋亡的过程。浆片凋亡的过程是细胞的PCD过程。因此，研究浆片细胞PCD过程，必须从浆片细胞凋亡过程中的细胞超微结构动态、细胞内膜系统透性改变和PCD起始过程的分子信号三个方面入手，