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(奶牛乳房炎金黄色葡萄球菌的研究现状综述
新疆农业大学
专业文献综述
题 目: 奶牛乳房炎金黄色葡萄球菌的研究综 述 姓 名: 郭强强 学 院: 动物医学学院 专 业: 动物医学 班 级: 预防084班 学 号: 083631441 成 绩: 指导教师: 苏战强 职称: 讲师
2011年11月22日 新疆农业大学教务处制
奶牛乳房炎金黄色葡萄球菌的研究现状
作者:郭强强 指导教师:苏战强
摘要:金黄色葡萄球菌 (Staphyloccocus aureus Rosenbach) ,隶属于葡萄球菌属(Staphylococcus),是奶牛乳房炎的一种重要病原菌,可引起多种严重感染。有“嗜肉菌的别称,金黄色葡萄球菌是乳房炎感染常见的病原菌之一。其引起的奶牛乳房炎给奶牛养殖业造成了极大的经济损失,尽管牛场环境、挤奶操作和奶牛干奶期治疗等方面有了很大改善,金葡菌引起的乳房炎仍然被国内外牛场视为一种难以防治的疾病。
关键词:生物学特性、致病性、检验、分子生物学
一、生物学特性
三、检验
(1)PCR方法检验
采用的研究、试验方法和技术路线(包括工艺流程)
提取各个标准菌株
的基因组DNA
↓
采用标准金黄色葡萄球菌菌株
对设定引物的PCR反应条件
进行选择和优化
↓
用表皮葡萄球菌、
木糖葡萄球菌、
甲型溶血性链球菌、
乙型溶血性链球菌、
蜡样芽胞杆菌作对照
进行PCR扩增
检测引物对
金黄色葡萄球菌特异性
↓
↓——————————↓
↓ ↓
采用标准金黄色葡萄球菌菌株 采用生理生化的方法
探寻从乳样品中直接获取 乳中金黄色葡萄球菌分离
↓ ↓
↓ 用设计引物进行PCR扩增
↓ 检测引物对乳中分离出的金黄色葡萄球菌
↓ 不同菌株的普遍适用性
↓ ↓
↓--------------------------↓
↓
根据已总结出的从乳样品中直接获取金黄色葡萄球菌DNA模板的方法,
对从乳中分离出的金黄色葡萄球菌各个菌株分别处理获取模板,
进行PCR扩增,检测引物对金黄色葡萄球菌不同菌株的灵敏度
(2)Elisa方法检测
金黄色葡萄球菌肠毒素ELISA检测试剂盒
操作步骤
使用前,将所有试剂充分混匀。不要使液体产生大量的泡沫,以免加样时加入大量的气泡,产生加样上的误差。
根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定,能使用复孔的尽量做复孔。
加入稀释好后的标准品50ul于反应孔、加入待测样品50ul于反应孔内。立即加入50ul的生物素标记的抗体。盖上膜板,轻轻振荡混匀,37℃温育1小时。
甩去孔内液体,每孔加满洗涤液,振荡30秒,甩去洗涤液,用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤,洗涤次数增加一次。
每孔加入80ul的亲和链酶素-HRP,轻轻振荡混匀,37℃温育30分钟。
甩去孔内液体,每孔加满洗涤液,振荡30秒,甩去洗涤液,用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤,洗涤次数增加一次。
每孔加入底物A、B各50ul,轻轻振荡混匀,37℃温育10分钟。避免光照。
8 取出酶标板,迅速加入50ul终止液,加入终止液后应立即测定结果。
9 在450nm波长处测定各孔的OD值。
一般检验方法:
金黄色葡萄球菌的检验 样品处理:无菌取25g或25mL食品样品,放入225mL灭菌生理盐水中均质,制成10-1稀释液。 增菌培养:将10-1稀释液接入7.5%NaCl肉汤或胰蛋白胨肉汤中,37°C培养24小时。 分离培养:将上述稀释液或培养液分
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