蔗精典课件糖酶分离纯化产物的SDS-PAGE检测及蛋白质相对分子质量测定.pptVIP

* * 五、操作步骤 1、准备电泳装置：电泳槽、电泳仪。 2、配胶及凝胶的制备 （1）配制凝胶： 不连续体系SDS－聚丙烯酰胺凝胶配制 注：1、为去除抑制胶聚合的氧，加入AP前可进行抽气处理；2、过硫酸铵和TEMED的量应根据室温或聚合情况而定； 5 10 7.5 15 总体积 0.025 0.05 0.05 0.08 10% Ap 3.45 6.85 2.48 (3.42) 4.92 蒸馏水 0.005 0.005 0.005 0.01 TEMED 0.05 0.1 0.075 0.15 10% SDS 0.63 1.26 0.5mol/L Tris-HCL pH6.7 浓缩胶缓冲液 1.9 (0.95) 3.8 1.5mol/L (3mol/L)Tris-HCL pH8.9 分离胶缓冲液 0.85 1.7 3 6 30.8%凝胶贮液 5%浓缩胶所需试剂量(ml) 12%分离胶所需试剂量(ml) ⑵、凝胶板的制备 ① 分离胶的制备： 按上表配制7.5ml分离胶，混合均匀后用细长头滴管将凝胶液加至长、短玻璃板间的缝隙内，再用少许蒸馏水（或水饱和的异丙醇或正丁醇）沿长玻璃板板壁缓慢注入，约5mm高，以封住胶面，以促使聚合并使胶面平直，约30min后，凝胶与水封层间出现折射率不同的界线，则表示凝胶完全聚合，倾去水封层的蒸馏水，再用滤纸条吸去多余