第4章 胚胎培养和胚乳培养幻灯片.pptVIP

第四章 胚胎培养和胚乳培养 被子植物双受精（double fertilization): 二倍体合子 三倍体胚乳 幼胚培养: Hanning（1904）；Laibach（1925） 最先付诸应用的植物细胞工程技术：20世纪20年代建立的幼胚培养和胚胎拯救（embryo rescue)技术 中国学者在裸子植物胚胎培养方面的工作 1934 清华的李继侗和沈同发现银杏胚乳提取物可刺激离体胚生长 1941 Van Overbeek 发现椰乳对幼胚发育的促进作用 1943 罗士韦和王伏雄在Science发文章，离体培养云南松和云南杉幼胚成功。 胚乳培养的意义 胚乳：三倍体 ★胚乳细胞中储存大量淀粉、蛋白质和脂类，是研究这些产物代谢工程的理想系统 ★完全由薄壁细胞组成的均质组织，是实验形态发生学研究的极好材料。 ★胚乳植株－三倍体，高产、优质、果实无籽 1940 La Rue 最先培养胚乳 1970 Bhojwani 白花寄生获得胚乳植株 1977，1978 母锡金 王大元 第一节 胚胎培养 一、成熟胚培养 ☆盾片在胚吸收营养上有重要作用 ☆胚胎培养可以解除种皮抑制作用 ☆? MS适用于多种植物成熟胚培养 成功例子：杂种桃成熟胚培养与新品种培育 植物胚胎的发育时期 二、幼胚培养 幼胚在胚珠中异养，离体培养必须提供足够的营养和适宜的条件。 双子叶植物胚胎的发育时期：合子（zygote），二细胞原胚（two-celled proembryo），球形胚（globular embryo），心形胚（heart-shaped embryo），鱼雷形胚（torpedo-shaped embryo），拐杖形胚（walking-stick-shaped embryo），倒U形胚（inverted U-shaped embryo），成熟胚（mature embryo） 心形胚以后的双子叶胚较易培养，球形胚很难培养。 单子叶植物胚胎的发育时期与双子叶植物有很大不同。 幼胚的培养 ☆常用培养基：Nitsch、MS、1/2MS 禾谷类也用N6和B5 ☆ 幼胚培养需要的蔗糖浓度高于成熟胚，可用代 谢上惰性的甘露醇部分代替蔗糖来调节渗透压。 ☆ VB1和生物素对胚胎发育有重要作用。 ☆一般不需要外用激素。 ☆八分成熟的椰乳对幼胚促进最明显。 ☆胚乳看护培养（nurse culture） ☆弱光或黑暗培养 防止幼胚的提前萌发 幼胚的提前萌发：未成熟胚在培养基上未发育为成熟胚，而提前生长为瘦弱和畸形幼苗的现象。 抑制幼胚提前萌发的因素：提高培养基中蔗糖浓度（10％）；加入ABA（0.01~0.2mg/L）和酪蛋白水解物（200～500mg/L）；高温（32℃）、强光培养。 ABA可抑制幼胚吸水，使其脱水干燥，发育成熟。 操作实例和经验 双培养基 大麦幼胚培养基：B5 1/2MS 无机盐＋MS有机成分 普适于各种禾谷类幼胚培养 肌醇添加 胚胎培养的应用 1 1、拯救杂种胚获得稀有杂种 胚胎拯救：种间或属间杂交时，两个基因组表达不协调，多数情况下胚乳最先败育，胚仍然健康，可通过离体胚培养将杂种幼胚培养成植株，称为胚胎拯救。 把握好胚胎拯救的时间；盾片的作用；冷处理；先诱导杂种胚产生愈伤，再分化出杂种植株。 胚胎培养的应用2 2、产生单倍体：染色体消除之后，剥离胚培养 3、缩短育种周期：打破休眠 4、稀有植物的繁殖：Makapuno 第二节 胚乳培养和三倍体的产生 ☆多数情况先诱导胚乳细胞增生愈伤组织，再诱导愈伤分化器官或胚状体 胚和胚乳一起培养有利于胚乳愈伤形成，但之后就应去掉，免得胚愈伤与之混淆 ☆胚乳培养的应用前景： 胚乳细胞分裂不规则，胚乳植株中既有三倍体，也有许多非整倍体。 ☆三倍体的经济价值：无籽果实；生物量高；品质好；获得三体以进行基因定位。 * *