第二十一章 免疫学所有实验幻灯片.ppt

第二十一章 免疫学检测原理 免疫学检测乃借助免疫学、细胞生物学和分子生物学理论或技术，对抗原、抗体、免疫细胞及其分泌的细胞因子等进行定性或定量检测。免疫学检测技术在医学生物学研究领域得到广泛应用，并在临床实践中用于探讨免疫相关疾病的发病机制及其诊断、病情监测与疗效评价等。随着现代免疫学以及细胞生物学、分子生物学等相关学科的进展，免疫学检测技术不断发展和更新。 第一节 基于抗原-抗体反应的检测方法 第二节 免疫细胞的检测 第三节 免疫分子的检测 学习指导 1、掌握凝集反应和沉淀反应的概念 2、掌握免疫细胞和免疫分子常用检测方法的名称 3、熟悉三大标记技术的原理和方法及其应用 4、了解免疫学方法的研究概况、进展及在临床中的应用 第一节 基于抗原-抗体反应的检测方法 一、抗原抗体结合反应的特点（熟悉） （一）特异性和交叉反应 （二）抗原-抗体结合的带现象与可见性 抗体反应中，可能出现抗原或抗体过剩的情况，由于过剩一方的结合价不能被完全占据，多呈游离的小分子复合物形式，或所形成的复合物易解离，不能被肉眼察见，此为前带现象（prozone）即抗体过剩，或后带现象(postzone)即抗原过剩。 （三）可逆性 抗原-抗体反应为分子表面的非共价结合，结合虽稳定但可逆。 第一节 二、抗原-抗体反应的影响因素（熟悉） （一）电解质 （二）酸碱度抗原抗体反应的最适pH是6~8。 （三）温度 抗体-抗原反应的最适温度为37℃。 （ 四）抗原和抗体的性质 抗体的特异性和亲和力是决定抗原-抗体反应的关键因素。 抗原和抗体的浓度、比例对抗原-抗体反应的影响最大，是决定性因素 第一节 三、抗原抗体反应的基本检测方法 （一）凝集反应（图21-1）（掌握） 细菌、红细胞等颗粒性抗原与相应抗体结合后，在一定条件下出现肉眼可见的凝集物，此为凝集反应(agglutination)。 1．直接凝集 2．间接凝集 3．间接凝集抑制试验 各种凝集反应示意图 第一节 三、抗原抗体反应的基本检测方法 （二）沉淀反应（掌握） 可溶性抗原（血清蛋白质、细胞裂解液或组织浸液、各种微生物蛋白分子等）与相应抗体结合后，在一定条件下出现肉眼可见的沉淀，此为沉淀反应(precipitation)。 1．单向免疫扩散(single immunodiffusion) 2．双向免疫扩散(double immunodiffusion) 3．免疫电泳(immunoelectrophoresis) 4．免疫比浊(immunonephelometry) 单向免疫扩散(single immunodiffusion) 双向免疫扩散(double immunodiffusion) 免疫电泳(immunoelectrophoresis) 对流免疫电泳 火箭免疫电泳 第一节 三、抗原抗体反应的基本检测方法 （三）补体参与的反应（了解） 应用抗体与红细胞表面抗原结合，激活反应体系中的补体成分，根据溶血现象判定试验结果。补体结合试验和溶血空斑试验（后叙）均属此类反应。补体结合试验曾用于检测多种细菌、病毒的抗原或抗体，因易受多种试验条件影响，已渐被其他方法取代。此外，补体依赖的微量细胞毒实验曾用于HLA的血清学分型，方法是：将标准分型血清与待检淋巴细胞反应，再加入兔补体，若细胞表面表达相应HLA抗原，则被溶解。溶解细胞可被台盼蓝或伊红染料着色，而活细胞不着色，藉此判定结果。 第一节 三、抗原抗体反应的基本检测方法 （四）免疫标记技术（熟悉） 免疫标记技术（immunolabelling technique）乃用荧光素、酶、放射性核素或化学发光物质等标记抗体或抗原，进行抗原-抗体反应的检测，是目前应用最为广泛的免疫学检测技术。标记物与抗体或抗原连接后并不改变抗原抗体的免疫特性，具有灵敏度高、快速、可定性、定量、定位等优点。 。 第一节 三、抗原抗体反应的基本检测方法 （四）免疫标记技术 1．免疫荧光法(immunofluorescence，IF) 此法乃用荧光素与抗体连接成荧光抗体，再与待检标本中抗原反应，置荧光显微镜下观察，抗原-抗体复合物散发荧光，借此对抗原进行定性或定位。 （1）直接荧光法： （2）间接荧光法： 免疫荧光法(immunofluorescence，IF) 第一节 三、抗原抗体反应的基本检测方法 （四）免疫标记技术 2．酶免疫测定(enzyme immunoassay， EIA) （1）酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay，ELISA)：是酶免疫测定中应用最