无菌检测操作规程.docVIP

无菌检测作业指导书 1目的 规范公司产品的无菌检测的工作流程和内容。 2 适用范围 生化实验室内的无菌室。 3职责 生化实验室：无菌检验专员：负责公司产品的无菌检测。 4 定义 4.1 成 品：环氧乙烷（EOG）））附页1 一、培养基的制备 1. 硫乙醇酸盐流体培养基(用于培养好氧菌、厌气菌) 酪胨（胰酶水解） 15g 氯化钠 2.5g 葡萄糖 5g 新配制的0.1％刃天青溶液 1.0ml L-胱氨酸 0.5g (或新配制的0.2％亚甲蓝溶液0.5ml) 硫乙醇酸钠 0.5g (或硫乙醇酸0.3ml) 琼脂 0.75g 水 1000ml 酵母浸出粉 5g 除葡萄糖和刃天青溶液外，取上述成分混合，微温溶解后，调节pH为弱碱性，煮沸，滤清，加入葡萄糖和刃天青溶液，摇匀，调节pH值使灭菌后为7.1±0.2，分装至适宜的器中，其装量与容器高度的比例应符合培养结束后培养基氧化层（粉红色）不超过培养基深度的1/2。灭菌。 在供试品接种前, 培养基氧化层的高度不得超过培养基深度的1/5，否则,须经100℃水浴加热至粉红色消失（不超过20分钟）迅速冷却, 只限加热一次，并应防止被污染。硫乙醇酸盐流体培养基置30~35℃培养。 2. 改良马丁培养基（用于培养真菌） 胨 5g 磷酸氢二钾 1g 酵母浸出粉 2g 硫酸镁 0.5g 葡萄糖 20g 水 1000ml 除葡萄糖外，取上述成分混合，微温溶解，调节pH值约为6.8，煮沸,加入葡萄糖溶解后，摇匀，滤清，调节pH值使灭菌后为6.4±0.2，分装，灭菌。 改良马丁培养基置23~28℃培养。 二、提取液、冲洗液的制备 1. PH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液 取磷酸二氢钾3.56g、磷酸氢二钠7.23 g 、氯化钠4.30g 、蛋白胨1.0g，加水1000ml，微温溶解，滤清，分装，灭菌。 2. 0.9%氯化钠溶液 取氯化钠9g，加水1000ml，溶解，分装，灭菌。 附页2 一、培养基的适用性检查 1.无菌性检查 取灭菌后的两种培养基各5支，按规定温度培养14天，均应无菌生长 2.灵敏度检查 2.1.所需菌种 金黄色葡萄球菌[CMCC(B)26 003] 枯草芽孢杆菌[CMCC(B)63 501] 生孢梭菌[CMCC(B) 64 941] 白色念珠菌[CMCC（F）98001] 黑曲霉[CMCC(F)98 003] 2.2菌液制备 2.2.1 将金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌的新鲜培养物分别接种至营养肉汤培养基中，35 ℃培养24小时，分别用0.9%无菌氯化钠溶液稀释成每毫升含50-100cfu的菌液。 2.2.2 接种生孢梭菌的新鲜培养物至硫乙醇酸盐流体培养基中，35℃培养24h，用0.9%无菌氯化钠溶液稀释成每毫升含50-100cfu的菌液。 2.2.3 将白色念珠菌的新鲜培养物接种至改良马丁培养基上，24℃培养48小时，用0.9%无菌氯化钠溶液稀释成每毫升含50-100cfu的菌液。 2.2.4 将黑曲霉菌的孢子接种至改良马丁琼脂斜面培养基上，24℃培养5天，加入5毫升0.9%无菌氯化钠溶液，将孢子洗脱。然后用一支管口包有无菌棉花且能过滤菌丝的10毫升吸管吸出孢子悬液至无菌试管内，用0.9%无菌氯化钠溶液制成每毫升含孢子数50-100cfu的孢子悬液。 2.3 培养基接种 取每管装量为12ml的硫乙醇酸盐流体培养基9支，分别接种确定好稀释级的金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、生孢梭菌各2支，另1支不接种作为空白对照，培养3天；取每管装量为9ml的改良马丁培养基5支，