第3章抗体制备范例.ppt

* * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * 2. 离子交换层析法 常用的离子交换剂有DEAE纤维素或QAE纤维素。此法获得的IgG较纯，不含其它杂蛋白。 3. 亲和层析法装柱上样结合洗脱 Sephadex G25-SPA （二）特异性抗体的纯化 单价特异性：指抗血清只与其特异性抗原发生反应。 有时免疫原不纯，含有微量的杂抗原，制备出的抗血清中出现2-3种杂抗体。 １.亲和层析法 交叉杂抗原 Sepharose4B 单价特异性抗体 抗体 ２、吸附法 双功能交联剂 固相吸附剂 收集上清液 抗血清 ＋ 交叉抗原液 第四节 单克隆抗体的制备及应用 一、杂交瘤技术的基本原理 细胞工程抗体——杂交瘤-单克隆抗体 骨髓瘤细胞 致敏的B淋巴细胞 杂交瘤 二、杂交瘤细胞 的 制备过程 三、单克隆抗体的生产 1.动物体内诱生法 2.体外细胞培养法 3.兔单克隆抗体 四、单克隆抗体纯化 五、单克隆抗体鉴定 六、单克隆抗体的特性 1.高度特异性 2.高度均一性 3.弱凝集反应和不呈现沉淀反应 4.细胞毒作用较弱 5.对环境敏感性 七、单克隆抗体的应用 1.临床检验诊断试剂 2.蛋白质的纯化 3.肿瘤的导向治疗 4.放射免疫显像技术 第五节 基因工程抗体及应用 人源化抗体 小分子抗体 双特异抗体 抗体融合蛋白 噬菌体抗体库技术 重组多克隆抗体 基因工程抗体的应用 思 考 题 1．如何制备可溶性抗原？ 2. 如何制备抗血清？ 3．抗血清的鉴定包括哪些内容？ 小 结 抗血清是经过抗原免疫的动物血清。在含有多种抗原表位的抗原刺激下，体内多个B细胞克隆被激活并产生针对多种不同表位的抗体，其混合物为多克隆抗体。 特异性IgG抗体的纯化方法有盐析法、凝胶过滤法、离子交换层析法、亲和层析法等；制备单价特异性抗血清可采用亲和层析法和吸附剂方法。 本章概要 * * * * * * * * * * * * * * * 三、半抗原 半抗原（无免疫原性） ＋ 载体 完全抗原（具免疫原性） 机体 抗体/致敏淋巴细胞 多肽、多糖、甾族激素、脂肪胺、类脂质、核苷、某些药物以及其他化学物品等。 1、载体的选择 ①蛋白质：牛血清白蛋白、人血清白蛋白、兔血 清白蛋白、牛甲状腺球蛋白 ②多肽聚合物：多聚赖氨酸 ③大分子聚合物： 羧甲基纤维素 聚乙烯吡咯烷酮 2、半抗原与载体的连接方法 ①物理方法 ②化学方法 碳化二亚胺法： R-NH=CH-R’ 半抗原＋载体蛋白质 搅拌1-2h 室温24h 透析除去未反应的半抗原 混合 人工免疫原 戊二醛法: ☆戊二醛是常用的带有两个活性基团的双功能联接剂☆ 半抗原-NH2 载体蛋白-NH2 半抗原-N=CH-(CH2)3-CH=NH-载体蛋白 OHC-(CH2)3-CHO 混合 第二节 免疫佐剂 免疫佐剂（immunoadjuvant）： 预先或与抗原同时注入体内，可增强机体对该抗原的免疫应答或改变免疫应答的类型的物质称为免疫佐剂,简称佐剂（adjuvant）。 一、佐剂的种类 化合物 生物制剂 人体的佐剂：氢氧化铝、明矾、poly I∶C、胞壁酰二肽、细胞因子、热休克蛋白 动物的佐剂：弗氏佐剂 弗氏佐剂(Freund,s adjuvant)： 弗氏完全佐剂－羊毛脂 与液体石蜡的混合物 弗氏完全佐剂－弗氏不 完全佐剂加卡介苗 乳化方法： 研磨法和搅拌混合法 作用大于不完全佐剂 局部形成肉芽和溃疡 不能用于人体 弗氏完全佐剂 弗氏佐剂(Freund adjuvant) 液体石蜡 完全乳化 备用 ＋ 高压 灭菌 加热 抗原 弗氏不完全佐剂 卡介苗 羊毛脂 鉴定 一滴 乳剂 乳剂不散浮于液面 水中 混合 细胞因子佐剂 IL-1、IL-2、INF?、GM-CSF 应用: 抗寄生虫免疫 抗肿瘤免疫 二、佐剂的生物学作用 1. 增强抗原免疫原性，使免疫原持久 2. 增强对抗原反应性，提高抗体产生效价 3. 引起或增强迟发型超敏反应 三、佐剂的作用机制 1.改变抗原的物理性状、延缓抗原降解、延长停留时间、有助于APC对抗原的摄取。 2.活化APC，增强APC对抗原的加工和提呈 3.刺激淋巴细胞增殖分化，扩大免疫应答 第三节 多克隆抗体的制备及应用 目的： 获取高质量抗体用于检测抗原或抗体同时也为诊断性试验提供特异的诊断试剂 抗血清的制备是将制备好的免疫原按照一定的免疫程序接种给所选择的动物，该动物在含有多种抗原表位的抗原刺激下，体内多个B细胞克隆被激活并产生针对某一抗原多种