APbiology细胞工程（参考）.ppt

相互促进植物生长的作用。生长素促进顶芽生长，赤霉素则促进侧芽生长。生长素使雌花增加，赤霉素使雄花形成。 常规高压蒸汽灭菌：121℃、0.1Mpa高压下灭菌15~20min(适用于易高温灭菌者)，灭菌后的培养基可在室温下储存（最适温度为10℃），一般应在灭菌后2天内使用。如培养基中含有热敏物质不能采用高温灭菌，通过各种细菌过滤器采用过滤灭菌。 * Cell engineering * 蒸馏器 组织培养对水的质量要求极高，一般都要用三次蒸馏的水，各种培养基及缓冲液的配制要用四蒸水，且现蒸现用，不宜使用存放数日的蒸馏水。目前国内多使用自动双重纯水蒸馏器（石英管加热），不可采用普通自来水蒸馏，一般用纯水蒸馏。 滤器 是细胞培养中关键的器械。分三种：①玻璃滤器：基本不用。②蔡氏滤器：一种金属滤器，用于量大的溶液过滤。③微孔滤膜滤器：金属或塑料结构，中间为一种一次性的物制混合纤维素滤膜。速度较快，效果较好，但使用比较繁琐，拆装、清洗、监测和消毒。 * Cell engineering * 自动双重纯水蒸馏器 纯水仪 细胞生长条件 * Cell engineering * Zeiss滤器：大多数培养用液过滤除菌均采用滤过法除菌。 微孔滤膜滤器 * Cell engineering * 液氮罐 用来储存细胞的容器，液氮温度可达-196℃，可长期保存细胞约一年左右。 显微镜 常用倒置显微镜观察细胞：一是了解细胞生长情况，二是检查是否发生污染。需购买质量较好并带有长焦距相差装置和摄影或摄像装置的倒置显微镜，如附有荧光装置则更为理想。 天平 细胞培养配置溶液一般使用精确到万分之一克（0.1mg）的电子分析天平。 酶标仪 用于细胞活力监测和生长曲线的制作。 * Cell engineering * 实验室器械和器皿 1.金属器械 主要是用于解剖动物、取材和原代动物切割组织。 一般配置3~4套以上，操作前灭菌，用时随时拿取，每次一套。 常用的有：解剖刀、解剖剪（尖头和圆头）、眼科剪、镊子（平头和尖头）、缝合针、持针器、止血钳、巾钳、骨剪、骨针等。 各种金属器械使用后，要及时刷洗干净，再用洒精棉球擦拭晾干，张开刀口，以防生锈。 * Cell engineering * * Cell engineering * 2.玻璃器皿 ①培养瓶：②玻璃瓶：③培养皿：④吸管：⑤抽滤瓶：⑥量桶：⑦消毒筒：⑧匀浆器：⑨离心管：⑩溶液瓶等等。 3.其它杂品 ①洒精灯，②煮沸锅，③铝饭盒，④胶塞，⑤胶帽，⑥拖鞋，⑦洗衣机，⑧金属筐，⑨盆，⑩器械托盘等等。 * Cell engineering * 移液器 细胞检测条件 * Cell engineering * 二、常用培养液及其配制 1.细胞培养条件 无污染环境条件：无毒和无菌是首要条件。 培养温度：人和动物细胞以35~37℃最适。 对低温的耐受性要好。pH值：最适7.2~7.4，不超过6.8~7.6。 缓冲系统：常用磷酸盐缓冲系统（磷酸二氢钠和磷酸氢二钠），通入CO2。也用HEPES（二羟乙基哌嗪乙烷磺酸），25 mmol/L，能稳定和快速地抵抗pH的变化。 * Cell engineering * 气体环境 细胞的生长需要CO2和O2参与。CO2作为代谢产物起到调解pH的作用，若容器内CO2散失后，会使培养液pH升高。因此，CO2培养箱提供一定比例的CO2气体，使培养环境中的氢离子浓度保持稳定，pH范围恒定。 * Cell engineering * 营养条件 能进入细胞、被细胞利用，参与代谢活动的物质都是营养物质。 主要有以下几个方面： 碳素营养、氨基酸类、维生素类、无机盐、矿物类、激素、生长因子及其它有机物。 * Cell engineering * 2.动物细胞的培养液 1）培养液的成分 尽可能与体内生活条件相接近，如温度、渗透压、pH、营养成分、激素等，满足上述的7个条件。 2）培养液的类型 常用三大类培养液：平衡盐溶液（BSS）、天然培养基、合成培养基。 3）其他常用培养液 消化液 抗菌素 谷氨酰胺等。 * Cell engineering * （1）平衡盐溶液（balanced salt solution, BSS） 主要有无机盐和葡萄糖组成。BSS液中常用0.001~0.005%的酚酞做指示剂： pH 7.4 红色、pH 7