实验六 病毒的观察与培养真菌的培养方法与形态观察.pptVIP

实验六　病毒的观察与培养真菌的培养方法与形态观察 实验内容： 1.病毒的观察：形态观察及生长状况观察 2.病毒的培养 3.真菌的培养、形态观察（真菌的单染法）和浅部真菌病临床标本检查 1.病毒的观察 （1）病毒的形态观察 （2）病毒的生长状况观察 ?病毒的形态结构 （2）病毒的生长状况观察 病毒在细胞中生长繁殖的指标： 1) 细胞病变效应（cytopathic effect, CPE）: 有些病毒在细胞内增殖时可引起细胞发生特有的形态学变化（细胞病变），称为细胞病变效应（CPE ）。2）包涵体 (inclusion body)：3）红细胞吸附：4）干扰现象： 正常细胞 2.病毒的培养 病毒的培养方法包括： （1）动物接种 （2）鸡胚培养 （3）细胞培养 （3）细胞培养：将人或动物离体组织块或分散的活细胞，模拟体内的生理条件在试管或培养瓶内加以培养，使之生存和生长，称为组织培养。目前一般所指的组织培养多指单层细胞培养。 是目前最常用的方法。常用的细胞有： ①原代培养细胞：采用机械或胰蛋白酶等处理离体的新鲜组织器官，制成分散的单个细胞悬液，加入生长液后，分装于培养管中培养，活细胞贴壁生长繁殖，数天后形成单层细胞，称原代细胞培养。 ②二倍体细胞株：原代细胞经过多次传代仍能保持二倍体特性，称为二倍体细胞株。 ③传代细胞系或株：来源于肿瘤细胞或细胞株在传代过程中变异的细胞系，是能在体外无限传代的细胞系。 动物细胞原代培养过程图 3.真菌的培养与形态观察 （1）真菌的培养方法 （2）真菌的形态观察 （3）浅部真菌病临床标本检查 （1）真菌的培养 　真菌的营养要求不高； 　常用沙保弱培养基(Sabouraud′s　medium)：　　　　 　　　蛋白胨、葡萄糖、氯化钠和琼脂。 　温度：22～28℃，但某些深部感染的真菌为37℃。 　pH：4.0～6.0 　生长速度:较慢 可出现三种菌落：（1）酵母型菌落：与细菌菌落相似，圆形，表面光滑、湿润、柔软而致密、乳白或奶油色。（2）类酵母菌落：菌落表面同酵母型菌落，在菌落根部有假菌丝伸向培养基内生长，乳白色。（3）丝状菌落：是多细胞真菌的菌落形式，由许多疏松的菌丝体构成，菌落呈棉絮状，绒毛状或粉末状、菌落中央有皱褶，外围有放射状沟，多为茶褐色。 小培养法：小培养法是采用真菌培养板或普通载玻片进行真菌培养。培养物可直接于显微镜下检查，也可经染色后观察。 （2）真菌的形态观察 真菌的单染法（白假丝酵母菌） 实验步骤： ①制片（同革兰染色） ②染色：滴加结晶紫（或碱性亚甲蓝）染色1min，水洗，吸干，油镜观察。 （3）浅部真菌病临床标本检查 浅部真菌病临床上极为常见，包括手癣、足癣、甲癣、头癣、体癣和股癣等，其在检查方面多采用直接镜检。 示教：皮肤真菌 实验材料：白假丝酵母菌一管/小组，结晶紫1瓶/小组，玻片1个/人 实验报告内容 真菌的单染 　实验原理、实验步骤、实验结果绘图和结果分析。 实验课考试： 考试内容－细菌的单染 注意事项－ 无菌操作、制片、染色、显微镜使用 请每人准备一张空白纸，在左上角写上本人姓名和学号。 医学微生物学实验 痘病毒 脊髓灰质炎病毒 鼻病毒 上为模式图，下为电子显微镜下观察结果 烟草花叶病毒 狂犬病毒 噬菌体 上为模式图，下为电子显微镜下观察结果 细胞病变效应 CPE 示教：病毒感染细胞CPE/正常细胞 Negri body in a neuron 示教：病毒包涵体 （1）动物接种 （2）鸡胚培养：目前主要用于流感病毒的分离培养。 气室 卵壳 壳膜 尿囊腔 绒毛尿囊膜 胚胎 羊膜腔 卵黄 卵白 天花病毒，痘病毒和HSV 流感病毒，腮腺炎病毒 流感病毒初次分离 嗜神经病毒 示教：原代细胞培养录像 白假丝酵母 (血平板) 黄曲霉 示教：酵母、类酵母型菌落和丝状真菌菌落 单细胞真菌：白假丝酵母，卵圆形，革兰染色阳性，着色不一，可见假菌丝。 多细胞真菌：丝状菌或霉菌，有菌丝和孢子。 烟曲霉 白假丝 酵母 细胞病变效应：病毒在细胞内增殖，可引起不同的结果，有的细胞完全被破坏，有的只有轻微的病变，或无可见的变化，由病毒引起的细胞病变，称CPE。往往随病毒种类和细胞类型不同而异。这些变化在一定条件下比较恒定。常见的为细胞变圆，坏死，溶解或脱落等。腺病毒 细胞变圆，并堆积成葡萄状，麻疹可形成多核巨细胞或融合细胞。 包涵体：某些病毒感染的细胞中，在光镜下，可见胞浆或核内出现嗜酸或嗜碱性染色，大小和数量不同的圆形或不规则的团块结构，称为 inclusive body。狂犬，baozhi，嗜酸；麻疹，