DNA的粗提取和鉴定.docVIP

DNA的粗提取和鉴定 【基础知识】 【疑难点拨】 1.基本原理：①DNA的溶解性：易溶于蒸馏水和2mol/L的NaCl溶液；难溶于冷却的体积分数95%的酒精和0.14 mol/L的NaCl溶液（技巧：溶解就选滤液，难溶就选过滤物）。 ②DNA对酶、高温和洗涤剂的耐受性：（木瓜）蛋白酶水解蛋白质，对DNA无影响；60--80℃的高温大多数蛋白质变性，DNA保持相对稳定；洗涤剂溶解细胞膜，对DNA无影响。 2.鉴定：DNA和二苯胺沸水浴5min，冷却后观察颜色为蓝色。 3.鸡血为材料需使用抗凝剂—柠檬酸钠和蒸馏水；植物细胞提取DNA需使用洗涤剂和食盐 1．下列有关“DNA的粗提取与鉴定”的叙述，正确的是 A．DNA在NaCl溶液中的溶解度随NaCl浓度的升高而增大 B．DNA对洗涤剂的耐受性差，对高温的耐受性强 C．在沸水浴的条件下，DNA遇二苯胺试剂会被染成蓝色 D．可以选择新鲜的猪血、花椰菜等作为实验材料 .下图为“DNA粗提取和鉴定”实验的相关操作。这些操作目的正确的是 A.①是洗涤红细胞，去除血细胞表面的杂质B.②是溶解DNA，去除不溶于酒精的杂质 C.③溶解DNA，去除不溶于2mol/LNaCl溶液的杂质 D.④稀释NaCl溶液，去除不溶于低浓度NaCl溶液的杂质 ．下表有关“DNA粗提取和鉴定”的相关操作中所选取的试剂，不正确的是 相关操作 选取的试剂 A 破碎鸡血细胞 蒸馏水 B 溶解核内DNA 2mol/LNaCl溶液 C 提取杂质较少的DNA 冷却的95%的酒精 D DNA的鉴定 双缩脲试剂 . 下列关于“DNA 粗提取与鉴定实验”的叙述，正确的是 A. 洗涤剂能瓦解细胞膜并增加DNA 在NaCl 溶液中的溶解度 B. 将DNA 丝状物放入二苯胺试剂中沸水浴后冷却变蓝 C. 常温下菜花匀浆中有些酶类会影响DNA 的提取 D. 用玻棒缓慢搅拌滤液会导致DNA 获得量减少 6．下列DNA粗提取的实验操作中，经离心或过滤后取上清液或滤液的有 A．在新鲜鸡血中加入适量的柠檬酸钠，混合均匀后离心 B．在盛有血细胞的塑料烧杯中加蒸馏水，快速搅拌后过滤 C．在2mol／L的氯化钠溶液中放入丝状物，轻轻搅拌后过滤 D．在溶有DNA的氯化钠溶液中缓缓加入蒸馏水，轻轻搅拌后过滤 ．某同学以菜花为实验材料，进行“DNA的粗提取与鉴定”实验，步骤如下： 步骤一：称取30g菜花，去梗取花，切碎。 步骤二：将碎菜花放入研钵中，倒入10mL研磨液，充分研磨10min。 步骤三：在漏斗中垫上滤纸，将菜花研磨液过滤到烧杯中。在冰箱中放置几分钟，取上清液。 步骤四：将一倍体积的上清液倒入两倍体积的某溶液中，并用玻璃棒缓缓、轻轻地搅拌溶液。将絮状物缠绕在玻璃棒上。 请回答下列问题： （1）请指出并改正该同学实验操作中的错误：___________________。 （2）步骤二的目的是使菜花细胞破碎，释放DNA，加入研磨液的主要成分有____和___等。（3）如要使步骤三所得上清液中杂质减少，可进行______操作后再置于冰箱。 （4）步骤四中所用两倍体积的某溶液为_________________，需“缓缓、轻轻地”搅拌溶液的原因是______________。【基础知识】 1.酶固定是指将酶固定在颗粒状不溶于水的载体上，优点是既能与反应物接触，又能与反应物分离；可重复利用。 2.固定化酶和固定化细胞技术常用的方法：包埋法、化学结合法、物理吸附法。酶个小，容易从包埋材料中漏出，故适宜采用化学结合法、物理吸附法；而细胞个大，难以被吸附或结合，宜采用包埋法（海藻酸钠）。 3.固定化酵母细胞应采用包埋法，反应底物应为小分子（大分子物质难以进入细胞）。海藻酸钠采用小火间断加热融化，冷却后与活化的酵母菌混合，匀速缓慢的滴入CaCl2溶液中。 4.细胞固定化及发酵都在严格无菌条件下完成，发酵现象包括：产生气泡、闻见酒味。 5.游离的酶、固定化酶、固定化细胞的优缺点汇总： （1）游离的酶——优点：催化效率高 缺点：易失活；难回收，成本高；酶混合在产物中可能影响产品质量 （2）固定化酶——优点：既能与反应物接触，又能与反应物分离；可重复利用 缺点：一种酶只能催化一种或一类反应；酶活性可能会下降 （3）固定化细胞——优点：可催化一系列连续的反应；成本低，操作更容易 6.制备固定化酵母细胞常考知识点： （1）酵母细胞的活化：细胞从休眠状态进入活跃状态；体积变大、防溢出 （2）配置海藻酸钠溶液：作为关键步骤，应小火间断加热（3）海藻酸钠与酵母细胞混合：海藻酸钠先冷却（防止高温使酵母菌死亡），后加酵母菌 （4）固定化酵母细胞：操作要领——注射器推挤速