【全程方略】高中生物 专题5课题2 多聚酶链式反应扩增DNA片段精讲导学课件 新人教版选修1.pptVIP

【解析】(1)高温所起的作用类似于解旋酶,使双链DNA解聚为 单链。(2)C过程为PCR技术的延伸阶段,当系统温度上升至72℃ 左右时,溶液中的四种脱氧核苷酸在TaqDNA聚合酶的作用下合 成新的DNA链。TaqDNA聚合酶是耐热的,高温下不变性,所以一 次性加入即可。PCR即为体外DNA复制,所需条件与体内DNA复制 基本相同,都需要模板、原料、能量、酶,只不过为了便于控制 DNA复制过程,通过设置高温解旋代替了解旋酶的作用,省掉了 解旋酶作用过程中所需能量的供应,同时,加入了与模板链相结 合的引物作为子链延伸的起点,省掉了切除引物的过程,使PCR 过程更简洁。(3)PCR技术遵循半保留复制的特点。经过3次 * 循环,共产生23个DNA分子,其中有2个DNA分子含有15N标记。(4)在一个双链DNA分子中,(C+T)占碱基总数的一半,故T的数目为a-m,复制10次,相当于新增加了(210-1)个DNA分子,故需补充T的数目为(210-1)(a-m)。(5)基因中的碱基对改变属于基因突变。对一个DNA进行扩增,第一次循环时某一条模板链上发生碱基错配,以后按正常配对方式进行扩增,错配链作模板扩增的都是错误的DNA分子,原正常链扩增得到的DNA分子都是正常的DNA分子,故若干次后检测所有DNA的扩增片段,与原DNA相应片段相同的占75%。 * 答案:(1)C (2)TaqDNA聚合酶　一次　DNA模板,分别与两条模板链相结合的两种引物,四种脱氧核苷酸,同时通过控制温度使DNA复制在体外反复进行 (3)25% (4)(210-1)(a-m) (5)基因突变　75% * 【变式训练】“X基因”是DNA分子上一个有遗传效应的片段,若要用PCR技术特异性地拷贝“X基因”,需在PCR反应中加入两种引物,两种引物及其与模板链的结合位置如图1所示。经4次循环后产物中有5种不同的DNA分子,如图2所示,其中第⑤种DNA分子有几个(　　) * A.2　　　 　B.4　　 　　C.6　　 　　D.8 * 【解析】选D。PCR技术扩增时,由两种引物决定所扩增的片段的特定序列,上一次循环的产物为下一次循环的模板。第一次循环形成①和②,第二次循环形成①②③④4个DNA,以此类推,4次循环后共形成16个DNA,其中①②各1个,③④各3个,⑤共8个。 * 课题2　多聚酶链式反应扩增DNA片段 * * 一、PCR的原理及反应过程 1.生物体内DNA复制的条件: (1)原料:______________。 (2)模板:解旋后的每一条________。 (3)酶:打开DNA双链的_______和合成DNA单链的__________。 (4)引物:为DNA聚合酶的起始提供___末端。 4种脱氧核苷酸 DNA母链 解旋酶 DNA聚合酶 3′ * 2.PCR的概念和原理: (1)概念:PCR即多聚酶链式反应,是一种体外________________ 的技术。它能以极少量的DNA为模板,在几小时内复制出上百万 份的DNA拷贝。 迅速扩增DNA片段 * (2)原理: ①DNA变性:在____________的温度范围内,DNA的_______结构 将解体,双链分开,这个过程称为变性。 ②DNA复性:当温度缓慢降低后,两条彼此分离的DNA链又会重新 ___________,这个过程称为复性。 ③DNA合成:DNA聚合酶从引物____端开始延伸DNA链,DNA的合成 方向总是从子链的____端向____端延伸。 80℃～100℃ 双螺旋 结合成双链 3′ 5′ 3′ * (3)条件: ①原料:_______________。 ②模板:热变性解旋后的两条________。 ③酶:________________。 ④引物:能分别与___________两端互补配对的两种引物,为DNA 聚合酶提供3′末端。 ⑤其他条件:需要稳定的_________和能自动调节温度的温控设 备。 四种脱氧核苷酸 DNA母链 耐热的DNA聚合酶 两条模板链 缓冲溶液 * 3.PCR的反应过程: 变性:当温度上升到___℃以上时,双链DNA解旋,氢键断裂,变为 单链 　 复性:当温度下降到___℃左右,两种引物通过_____________ 分别与两条单链DNA结合 　 延伸:当温度上升到___℃左右,溶液中的四种脱氧核苷酸 (A,T,G,C)在__________的作用下,根据_____________ 原则合成新的DNA链 90 50 碱基互补配对 72 DNA聚合酶 碱基互补配对 * 二、PCR的实验操作 1.实验用具: (1)PCR仪:该仪器能自动调控_____,实现DNA的扩增。如果没有 PCR仪,可用3个_____水浴锅代替,操作时按程