小鼠经口染毒急性毒性评价.docVIP

亚硝酸盐的急性毒性评价 摘要：此次试验主要是研究亚硝酸钠的急性毒性评价，通过对健康小鼠的选择，有毒性资料可查得亚硝酸钠的急性经口染毒LD50值，依据霍恩氏法LD50计算的设计原则按照随机数分组的方法将动物分成4个染毒组，每组4只小白鼠。一次灌胃给予受试物后，观察动物所产生的急性毒性反应及其严重程度，分析中毒死亡的原因，必要时进行解剖，观察受试物毒性反应与剂量的关系，采用霍恩氏法求出亚硝酸钠的半数致死剂量(LD50)，并根据LD50值将亚硝酸钠进行急性毒性分级，从而外推到人，推测亚硝酸钠的毒性对人的影响。 关键词：小鼠、亚硝酸钠、急性毒性、LD50、霍恩氏法 1．前言 亚硝酸钠（NaNO2），是亚硝酸根离子与钠离子化和生成的无机盐。亚硝酸钠易潮解，易溶于水和液氨，其水溶液呈碱性，其pH约为9，微溶于乙醇、甲醇、乙醚等有机溶剂。亚硝酸钠有咸味，又是被用来制造假食盐。亚硝酸钠暴露于空气中会与氧气反应生成硝酸钠。若加热到320以上则分解，生成氧气、氧化氮和氧化纳。接触有机物易燃烧爆炸。由于其具有咸味且价钱便宜，常在非法食品制作时用作食盐的不合理替代品，因为亚硝酸钠有毒，含有工业盐的食品对人体危害很大，有致癌性。肉类制品加工中用作发色剂，可用于肉类罐头、肉类制品。在肉制品中对抑制微生物的增殖有一定作用(对肉毒梭状芽孢杆菌有特殊抑制作用)，能提高腌肉的风味: 食品级亚硝酸钠用作食品添加剂时，最大使用量为0.15g/kg残留量肉类罐头≤0.05g/kg，肉制品≤0.03g/kgg左右），试验前要对动物饲养观察2~3天，以适应饲养环境，并淘汰不健康或体重不符合要求的动物。 2.2仪器与试剂 2.2.1器材： 注射器，灌胃针，普通天平，电子天平，吸管，吸球，容量瓶，玻璃棒，烧杯，试剂瓶； 2.2.2试剂： 亚硝酸钠，蒸馏水。 2.3实验方法 2.3.1实验动物与分组： 选健康成年小鼠(30g左右)，同性别实验动物个体间体重相差不得超过平均体重的10%，且此次试验所用的小鼠均为雄性小鼠，所得出的结论只能代表单一性别的实验情况。试验前动物要在试验环境中至少适应2~3d时间，以适应饲养环境，并淘汰不健康或体重不符合要求的动物本次试验取体重28.0~34.0的小鼠，试验时，将小鼠称体重、编号、按随机分组原则，按随机分组表将实验动物分成4组，每组4只。 16只小鼠的完全随机分配表如下 动物编号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 随机数字 09 47 27 96 54 49 17 46 09 62 90 52 84 77 27 08 余数 1 2 1 2 1 1 1 2 2 0 2 1 所属组别 A C B D B A C D A C D B D B A C 小鼠体重g 28.8 28.7 29.9 28.4 30.8 30.0 29.6 29.7 32.2 31.0 31.0 32.0 35.4 32.8 34.4 33.4 2.3.2剂量选择： 经过预试或查资料得到LD50 的大致范围，经查资料得口服-小鼠LD50为:200mg/kg； 各剂量组的间距可根据LD50计算方法要求按等比级数或等差级数安排。本实验用霍恩氏发法计算LD50，各组间计量递增公比为10^(2)，，由于温度越低亚硝酸钠的毒性越大，且实验室的温度较低，因此将LD50为:200 mg/kg设为第三剂量组 ，则染毒剂量组剂量分别为46.4mg/kg、100mg/kg、215mg/kg、464mg/kg。 2.3.3受试化学物配制与稀释 1、亚硝酸钠溶液以蒸馏水为溶剂配制成溶液 2、受试物的配制（等容量稀释）：根据计算结果精确量取需要的受试物的量，稀释成需要的浓度。 配制步骤： 组号 A B C D 染毒剂量 46.4mg/kg 100mg/kg 215mg/kg 464mg/kg 每只小鼠染毒毫克数（以每组小鼠平均体重计算） 1.5455mg 3.0826mg 6.7134mg 14.442mg 浓度 0.7273g/100ml 1.5413g/100ml 3.3567g/100ml 7.2210g/100ml 又每组实验动物都为四只，且计算其灌胃量由平均体重计算出来的，即每只小鼠所灌胃的体积是一样的，都为0.2ml，所以均用100ml容量瓶配置的四个不同浓度的亚硝酸钠溶液，根据上面表格数据得每组称取亚硝酸钠的克数为0.7273、1.5413、3.3567、7.2210，分别溶于100ml水中即可（若因溶解度限制可更据实验情况调整溶剂体积，但浓度不变）。 2.3.4灌胃： 1、灌胃实验试验前实验动物应禁食（一般6~8小时），不限制饮水。然后对各组动物用经口灌胃法一次染毒或24h多次染毒。一次灌胃液体积