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* 1 双波长分光光度法的原理 双波长分光光度法是在传统分光光度法的基础上发展起来的，它的理论基础是差吸光度和等吸收波长。它与传统分光光度法的不同之处，在于它采用了两个不同的波长即测量波长（又叫主波长λp, Primary Wavelength）和参比波长（又叫次波长λs, Second Wavelength）同时测定一个样品溶液[1,2]，以克服单波长测定的缺点，提高了测定结果的精密度和准确度。 早期的双波长分光光度计在测定时，两束不同波长的单色光经斩光器（Chopper，一种用于双波长分光光度计中使光束按一定周期反射，遮断或通过的装置）处理后，以一定的时间间隔交替照射[1]比色杯，经待测溶液吸收后，再照到光电管上，产生两个不同的吸光度，再将这两个吸光度相减，就得到了差吸光度ΔA。根据Lamber-Beer定律, 得： Aλ p = ελpLC + Ap (1) A λs = ελsLC + As (2) 式中 ： Aλ p 、A λs 分别为待测溶液在主波长和次波长处的吸光度 ελp 、 ελs 分别为待测溶液在主波长和次波长处的摩尔吸光系数 L：光径 C：待测溶液的浓度 Ap、As：分别为待测溶液在主波长和次波长处的散射或背景吸收 当λp 、λs相差不太大时，由同一待测溶液产生的光散射吸光度和背景吸光度大致相等，即Ap＝A s，将（1）式－（2）式得： Aλ p－A λ