免疫重组DNA技术.pptVIP

相关帮助 需要相关抗体试剂的可以访问Fantibody全球抗体搜索引擎: fantibody全球抗体搜索引擎是一个供公共检索的抗体数据库，其抗体信息数据来源于全球范围的研究机构与商业公司。该引擎由商品化抗体数据库与抗体应用评价数据库两部分组成，以帮助研究者更高效的寻找并评估该抗体的性能。全球抗体搜索引擎是继基因与蛋白数据库之后更为复杂的应用型检索平台 需要相关的实验室仪器设备、生物试剂、医疗器械、制药设备、医药原料、体外诊断试剂及耗材与技术服务信息的，可以访问探生网进行咨询，期待您的加入 加入一抗，反应后冲洗掉未结合的抗体。 （2）一抗结合 一抗 加入二抗，与一抗结合后再将未结合的二抗冲洗掉。二抗只识别一抗。 二抗上联着一种酶（碱性磷酸酶、过氧化物酶、脲酶等）。 （3）二抗结合 二抗 加入无色的底物，被二抗上所带的酶催化反应转变成有色物质（或发光）。 （4）显色反应 在特殊的分光光度仪（酶标仪）上比色，打印出结果。 （5）比色 3.ELISA的局限性 有效，但准确性稍差（主要取决于一抗的特异性）。 必须与其他方法一起综合考虑。 最好用单克隆抗体（monoclonal antibody） Transfer the DNA in the plaque or colony to a Nylon or nitrocellulose membrane Phage DNA bind to the membrane directly Bacterial colonies must be lysed to release DNA on the membrane surface. Hybridization (in a solution Containing Nucleic acid probe) Wash to remove unhybri- dization probe and visualize X-ray film(radio- actively labeled ) antibody or enzyme (modified nucleotide labeled Line up the hybridizated region or repeated hybridization (Alkali treatment) Transfer to nitrocellulose or nylon membrane Denature DNA(NaOH) Bake onto membrane Probe with 32p-labled DNA complementary to gene of interest Expose to film Select positive from master plate Keep master plate Screening by plaque hybridization Use DNA (or RNA) probe to detect DNA samples; Probe hybridizes with its complementary DNA; 4.1 Southern blot A Southern blot result Very easy to identify the positive clone 4.2 in situ hybridization 4.3 Northern blot Use DNA（or RNA) proble to detect RNA samples; 主要检测插入片断是否被转录。 从宿主细胞中提取RNA，再用探针杂交。 2. Electrophoresis analysis enzymatic digestion PCR reaction Electrophoresis analysis is based on the principal that the molecular weight of recombinant vector is larger than the wild one. 2.1 Direct analysis 从转化后的菌体克隆中分离质粒，电泳、比较其分子量。 MW Marker No insert With insert 2.2 Analysis after digestion 根据已知的外源DNA序列的限制性酶切图谱，选择一两种内切酶切割质粒，电泳后比较电泳结果（DNA带数和长度）。 或用合适的内切酶切下插入片断，再用其它酶切这个片断，电泳后比较结果是否符合预计的结果。 Before digestion Inserted fragement Vector After digestion A B A或B